le gélose endo ou Le milieu Endo est un milieu de culture solide et différentiel avec un certain degré de sélectivité. La formule originale a été créée par Endo en 1904 pour différencier les bactéries fermentant le lactose des bactéries non fermentantes. Initialement, il a été conçu pour isoler Salmonella typhi, mais plus tard, l'objectif du médium s'est tourné vers la recherche de coliformes.
Le principe Endo Agar est resté, mais sa formulation a subi d'innombrables changements au fil des ans. Actuellement, le milieu est composé de digestion peptique de tissu animal, de lactose, d'hydrogénophosphate dipotassique, de sulfite de sodium, de fuchsine basique et de gélose..
L'utilisation principale du milieu a été liée à l'isolement et à la différenciation des bacilles Gram négatifs appartenant à la famille des Enterobacteriaceae et à d'autres familles proches..
Pendant longtemps, il a été utilisé dans la détection de coliformes dans des échantillons d'eau, de produits laitiers et d'aliments, mais aujourd'hui l'utilisation de ce milieu a été remplacée par d'autres ayant des fonctions similaires. Cependant, certains laboratoires de microbiologie utilisent cette gélose pour l'isolement des entérobactéries à partir d'échantillons d'origine clinique..
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L'agar Endo contient des peptones qui servent de source d'acides aminés, d'azote, de carbone et d'énergie, nécessaires à la croissance de micro-organismes peu exigeants..
En revanche, le caractère légèrement sélectif de la gélose est apporté par l'addition de sulfite de sodium et de fuchsine basique; les deux composants inhibent partiellement ou totalement la croissance de la plupart des bactéries Gram positives.
Le caractère différentiel est donné par la présence de l'hydrate de carbone fermentescible, qui dans ce cas est le lactose et la fuchsine basique, qui sert également d'indicateur de pH..
Les bactéries à Gram négatif qui se développent sur cette gélose et sont capables de fermenter le lactose formeront de fortes colonies roses; étant pathognomonique de Escherichia coli la formation de colonies rouge foncé avec un éclat métallique verdâtre irisé. Cela est dû à la production élevée d'acides à partir de la fermentation des glucides..
Il convient de noter que le milieu autour des colonies prend également une forte couleur rose. Alors que les bâtonnets Gram négatifs fermentent sans lactose, forment des colonies de couleur rose pâle semblables à moyennes ou incolores..
L'hydrogénophosphate de potassium équilibre le pH du milieu et la gélose est le composant qui fournit la consistance solide.
Peser 41,5 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Chauffer le mélange en remuant fréquemment jusqu'à ce que le milieu soit complètement dissous. Stériliser en autoclave à 121 ° C, à une pression de 15 lb, pendant 15 minutes.
Lors du retrait de l'autoclave, laisser refroidir à une température d'environ 45-50 ° C, agiter le mélange pour homogénéiser avant de servir. Versez 20 ml dans des boîtes de Pétri stériles.
Laisser les assiettes se solidifier, inverser et conserver dans un plaquero ou envelopper de papier foncé avant de les conserver au réfrigérateur. Il est très important de protéger le milieu préparé de la lumière directe. Une pratique recommandée consiste à préparer la quantité exacte dont vous aurez besoin.
Si elles sont conservées au réfrigérateur, les assiettes doivent pouvoir se réchauffer avant utilisation..
Le pH du milieu doit être compris entre 7,2 et 7,6 et la couleur du milieu préparé est rose pâle..
Il existe une autre version de la gélose Endo (m-Endo) qui suit la formule de McCarthy, Delaney et Grasso, qui contient plus de composés et varie sous la forme de préparation.
Cette variante contient: Lactose, Tryptose, Digest enzymatique de caséine, Digest enzymatique de tissu animal, Chlorure de sodium, Phosphate de potassium dibasique, Sulfite de sodium, Extrait de levure, Phosphate de potassium monobasique, Fuchsine basique, Déoxycholate de sodium, Lauryl Sulfate de sodium et agar.
Dans ce cas, 51 g du milieu déshydraté sont pesés et mis en suspension dans 1 litre d'eau distillée contenant 20 ml d'éthanol..
Chauffer légèrement en remuant jusqu'à ce que le milieu se dissolve complètement. Il ne doit pas être surchauffé et ne doit pas être autoclavé. Une fois le mélange homogène, servir dans des boîtes de Pétri stériles et laisser se solidifier..
Dans certains pays, il est encore utilisé pour compter les coliformes totaux et fécaux dans les échantillons de nourriture et d'eau, en particulier à la recherche de la présence de Escherichia coli comme principal indicateur de contamination fécale.
L'agar M-Endo est recommandé par l'American Public Health Association (APHA) pour le suivi et le contrôle des programmes de désinfection et de traitement des eaux usées, ainsi que pour l'évaluation de la qualité de l'eau potable..
La méthode la plus utilisée est la filtration sur membrane, après avoir enrichi l'échantillon avec du bouillon de lauryl sulfate pendant 2 à 4 heures..
Il peut également être utilisé comme substitut de la gélose EMB dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau par la technique du nombre le plus probable (NPP), en particulier dans la phase de confirmation complète pour corroborer la présence de E. coli à partir de bouillons EC troubles.
Pour évaluer la qualité du lot de gélose Endo préparé, des souches témoins connues ou certifiées sont semées..
Parmi les souches qui peuvent être utilisées à cet effet, on trouve: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 et Enterococcus faecalis ATCC 11700.
Les souches sont ensemencées par épuisement et sont incubées à 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose.
Les résultats attendus sont:
-Le milieu Endo a un faible pouvoir sélectif, par conséquent, il est possible que certains micro-organismes Gram positifs tels que Staphylococcus, Enterococcus et même des levures puissent se développer..
-D'autres bacilles n'appartenant pas à la famille des Enterobacteriaceae peuvent se développer dans ce milieu, comme par exemple Pseudomonas sp Oui Aeromonas sp. Les caractéristiques de ces souches sont des colonies irrégulières incolores.
-Ce milieu préparé est très sensible à la lumière, par conséquent, une exposition prolongée à celui-ci détériore le système indicateur, endommageant de manière irréversible le milieu..
-Les composants du milieu sont considérés comme cancérigènes, donc le contact direct doit être évité.
-Le milieu déshydraté est très hygroscopique et doit être conservé dans son contenant d'origine à température ambiante, bien fermé et dans un environnement sec..
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