Gélose au sel et au mannitol Justification, préparation et utilisations

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Alexander Pearson

le gélose au sel et au mannitol ou le mannitol salé est un milieu de culture solide, sélectif et différentiel. Il a été créé par Chapman pour l'isolement des cocci Gram positifs pathogènes, en particulier Staphylococcus aureus.

Cependant, il est également utile pour isoler Epidermidis staphylococus, qui peut parfois être présent comme un pathogène opportuniste, et Staphylococcus saprophyticus, pathogène urinaire reconnu, entre autres espèces.

A. Fiola avec milieu gélose au mannitol salé préparé. B. Boîtes de gélose au mannitol salé ensemencées avec des souches bactériennes de mannitol fermentées et non fermentées. Source: A et B: Photos prises par l'auteur MSc. Marielsa gil.

Certains Enterococcus sont capables de croître sur ce milieu, ainsi que certains bâtonnets sporulants Gram positifs..

Ce milieu est très utile dans l'analyse d'échantillons cliniques, mais il est également utilisé dans l'étude microbiologique des aliments et dans le contrôle de qualité des produits industriels, tels que les cosmétiques, les médicaments, entre autres..

La gélose salée au mannitol est composée d'extraits et de peptones de bœuf, de tripteine, de mannitol, de chlorure de sodium, de rouge de phénol et d'agar.

Index des articles

  • 1 Justification
  • 2 Préparation
  • 3 utilisations
  • 4 Contrôle qualité
  • 5 Considérations finales
  • 6 Références

Base

La gélose au mannitol est sélective grâce à sa forte concentration en sel. La salinité agit comme une substance inhibitrice et empêche la croissance des bactéries à Gram négatif.

Il est également différentiel en raison de la présence du glucide mannitol et de l'indicateur de pH au rouge phénol. A partir de là, les bactéries capables de fermenter le mannitol produisent des acides, acidifiant le milieu, jaunissant les colonies et le milieu..

En revanche, les colonies qui ne fermentent pas le mannitol se développent dans le milieu absorbant les nutriments apportés par les extraits de viande et les peptones et la tripteine. De là, les bactéries extraient le carbone, l'azote, les vitamines et les minéraux nécessaires à leur croissance..

Les colonies dans ce cas peuvent être rose faible ou fort, et le milieu reste de la même couleur ou change en fuchsia.

L'agar est la substance qui donne la consistance au milieu.

préparation

Pour préparer un litre de gélose mannitol salée, 111 g du milieu déshydraté de la société commerciale préférée sont pesés et dissous dans 1000 ml d'eau distillée, à l'aide d'un ballon..

La chaleur est appliquée avec une agitation fréquente du milieu pour améliorer le processus de dissolution. Faire bouillir pendant une minute.

Placer le ballon dans l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.

À la fin du temps, sortir le flacon de l'autoclave, le laisser reposer et servir entre 15 à 20 ml sur des boîtes de Pétri stériles lorsque la température est d'environ 50 à 55 ° C..

Il est permis de se solidifier, de commander de manière inversée en plaqueros et de se conserver au réfrigérateur jusqu'à son utilisation. Avant de semer un échantillon, attendez que la plaque atteigne la température ambiante.

Les plaques sont ensemencées par stries ou par semis en surface avec une spatule drigalski. Le pH final du milieu préparé doit être de 7,4 ± 0,2

La couleur du milieu déshydraté est beige clair et la couleur du milieu préparé est le rouge orangé.

Applications

En raison de sa haute sélectivité, ce milieu est idéal pour semer des échantillons à flore mixte dans lesquels vous souhaitez rechercher la présence de Staphylococus aureus, en tant que principal pathogène de ce genre.

En ce sens, l'une de ses utilisations les plus fréquentes est l'analyse microbiologique des exsudats pharyngés et des échantillons d'écoulement nasal, notamment pour détecter les porteurs asymptomatiques de S. aureus.

Certains pays ont mis en œuvre cette analyse comme une exigence obligatoire pour les personnes qui souhaitent travailler comme vendeurs de produits alimentaires..

Ce contrôle empêche l'embauche de transporteurs de S. aureus, évitant ainsi les intoxications alimentaires massives, en raison de la consommation d'aliments contaminés par l'entérotoxine staphylococcique.

Il peut également être inclus dans l'ensemencement des infections des plaies, les hémocultures, le LCR, le lavage bronchoalvéolaire, entre autres.

La gélose au mannitol salée est utile pour ré-isoler des colonies à partir de cultures d'urine à partir de gélose CLED ou de gélose au sang dont le Gram a révélé des cocci à Gram positif en grappes..

Il est également valable dans l'analyse microbiologique des aliments, de l'eau potable, des sols, entre autres applications..

Contrôle de qualité

Une fois qu'un lot de plaques avec de la gélose au mannitol salé a été préparé, il est conseillé d'effectuer un contrôle qualité. Les souches de contrôle sont semées pour montrer s'il y a ou non croissance de la même.

En tant que contrôle positif, les souches connues de Staphylococcus aureus. Il devrait pousser de manière satisfaisante en développant des colonies jaunes, et le milieu prend également la même couleur.

De même, il convient d'inclure une souche connue de Staphylococcus epidermidis. Devrait pousser de manière satisfaisante en développant des colonies roses, et le milieu reste de la même couleur ou s'assombrit en un rose plus fort.

En tant que contrôle négatif, on utilise des souches qui ne devraient pas pousser sur ce milieu. Par exemple, une souche connue de Escherichia coli ou Klebsiella pneumoniae. Le résultat attendu est une inhibition complète, c'est-à-dire pas de croissance..

De plus, une plaque non inoculée doit être incubée. Il ne devrait y avoir ni croissance ni changement de couleur.

Il est important que la plaque ne soit pas utilisée s'il y a des signes de détérioration, tels que contamination, déshydratation, décoloration, entre autres.

Dernières pensées

Lors de l'utilisation d'un milieu gélose au mannitol salé, certains aspects importants doivent être pris en compte:

-L'obtention d'une croissance de colonies jaunes n'indique pas qu'il est Staphylococcus aureus. Il faut rappeler que certaines souches d'Enterococcus sont capables de croître dans ce milieu et de fermenter le mannitol, ainsi que certains bâtonnets sporulants Gram positifs..

Par conséquent, il est important d'effectuer un Gram sur la colonie et un test de catalase..

-En revanche, il faut considérer que d'autres espèces de Staphylococcus autres que aureus ils sont également capables de fermenter le mannitol. Par conséquent, il est important de repiquer la colonie dans un bouillon nutritif pour en prélever et effectuer le test de coagulase..

Parmi les espèces de staphylocoques d'importance clinique pour l'homme qui fermentent le mannitol, on trouve: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, entre autres.

D'autres peuvent donner une réaction variable, c'est-à-dire parfois positive et parfois négative. Quelques unes sont S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, entre autres.

-Il n'est pas recommandé de prélever des colonies directement sur de la gélose au mannitol pour effectuer le test de la coagulase, car la concentration élevée en sel du milieu peut interférer avec le résultat..

-Enfin, il est recommandé d'incuber les plaques ensemencées de mannitol salé jusqu'à 48 heures, car certaines souches de S. aureus peut fermenter lentement le mannitol, bien que cela soit rare.

Les références

  1. Laboratoires Britannia. Gélose au mannitol salé. 2015. Disponible sur: britanialab.com
  2. "Gélose au mannitol salé". Wikipedia, l'encyclopédie libre. 31 octobre 2018, 19:08 UTC. 17 janvier 2019, 20:55, disponible sur: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnostic microbiologique. (5e éd.). Argentine, Éditorial Panamericana S.A.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Argentine. Éditorial Panamericana S.A
  5. Laboratoires BD. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Disponible sur: bd.com.

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