le Gélose trypticaséine soja ou Trypticase Soy Agar est un milieu de culture solide, non sélectif et nutritif. Il est désigné par les lettres TSA pour son acronyme en anglais Trypticase Soy Agar. Il est composé de triptein, de peptone de soja, de chlorure de sodium et d'agar-agar.
En raison de son pouvoir nutritionnel élevé, il est idéal pour la culture de micro-organismes moyennement exigeants et non exigeants. Le milieu sans suppléments supplémentaires n'est pas recommandé pour les cultures primaires, mais il est très utile pour repiquer des souches pures et les maintenir viables, entre autres utilisations..
Aussi, cette gélose sert de base pour la préparation de milieux enrichis tels que la gélose au sang, en particulier lorsqu'il est nécessaire d'observer les schémas d'hémolyse et de monter les taxons optoquine et bacitracine, nécessaires au diagnostic de Streptococcus pneumoniae Oui Streptococcus pyogenes respectivement.
D'autre part, lorsqu'il est combiné avec des antibiotiques, il est utile d'isoler les micro-organismes anaérobies facultatifs et stricts d'importance clinique à partir d'échantillons à flore mixte..
Enfin, la composition de la gélose trypticaséine soja et ses performances répondent aux exigences établies par les différentes pharmacopées (européenne, japonaise et nord-américaine)..
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Pour le bon développement des bactéries, la présence de sources d'énergie est nécessaire, comme les acides aminés, les vitamines, les bases puriques et pyrimidiques..
En ce sens, la triptein et la peptone de soja fournissent ces nutriments aux microorganismes, permettant ainsi leur plein développement. Cependant, pour les bactéries exigeantes, il est nécessaire de compléter cette gélose avec du sang défibriné ou du sang réchauffé pour augmenter son enrichissement..
En revanche, si des antibiotiques sont ajoutés au milieu, celui-ci devient un milieu sélectif. Vous pouvez également ajouter 0,6% d'extrait de levure pour favoriser l'isolement des espèces du genre Listeria, tandis que l'ajout de tellurite de cystine Oui le sang d'agneau est idéal pour Corynebacterium diphteriae.
Enfin, le chlorure de sodium assure l'équilibre osmotique du milieu et la gélose donne la consistance solide..
Pour préparer la gélose trypticaséine soja, 40 g du milieu commercial déshydraté doivent être pesés sur une balance numérique. Il se dissout dans un litre d'eau distillée contenu dans un flacon.
Le mélange est laissé au repos pendant 5 minutes, puis il est porté à une source de chaleur pour aider à dissoudre le milieu. Il doit être remué fréquemment et bouilli pendant 1 ou 2 minutes. Par la suite, le milieu est stérilisé à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
Laisser refroidir à 50 ° C et répartir dans des boîtes de Pétri stériles. Laisser se solidifier, inverser, disposer en pattes de boutonnage et conserver au réfrigérateur.
Le pH final du milieu doit être de 7,3 ± 0,2.
Il est à noter que la couleur du milieu de culture déshydraté est beige clair et doit être conservé entre 10 et 35 ° C, dans un endroit sec.
De son côté, la gélose préparée est de couleur ambre clair. Les assiettes préparées doivent être conservées au réfrigérateur (2 à 8 ° C) jusqu'à leur utilisation..
Les plaques doivent atteindre la température ambiante avant utilisation.
La gélose au sang est préparée en ajoutant 5% de sang défibriné lors du refroidissement de la gélose tryptique de soja à 50 ° C. Le mélange est homogénéisé par rotation avec des mouvements doux.
Servir dans des boîtes de Pétri stériles. La couleur du milieu doit être rouge cerise.
Pour préparer la gélose au sang à base de TSA, procédez de la même manière que les procédures déjà décrites, mais en sortant de l'autoclave, laissez-le reposer jusqu'à ce que la température du milieu soit comprise entre 56 et 70 ° C environ. À ce moment-là, le sang est placé et mélangé jusqu'à ce que le milieu vire au brun..
Servir dans des boîtes de Pétri stériles. La couleur du support est brun chocolat.
La procédure de préparation de la gélose est la même que celle décrite pour les plaques, à la différence qu'au lieu de servir le milieu sur des boîtes de Pétri, il est réparti entre 10 à 12 ml dans des tubes avec couvercle en bakélite avant stérilisation..
Ensuite, les tubes sont autoclavés à 121 ° C pendant 15 minutes. En partant, ils se penchent à l'aide d'un support et les laissent se solidifier.
Les coins préparés sont semés par surface et servent à maintenir viables certains micro-organismes non exigeants pendant un temps spécifié..
La Trypticasein Soy Agar est utilisée dans les cas suivants:
-Comme base pour préparer la gélose au sang classique qui est couramment utilisée dans la plupart des laboratoires.
-L'isolement des bactéries exigeantes.
-Observation du schéma d'hémolyse.
-Exécution de tests de diagnostic.
-Comme base de préparation de la gélose au sang spéciale pour Corynebacterium diphteriae, avec tellurite de cystine Oui sang d'agneau.
-Comme base pour préparer de la gélose au sang d'agneau, plus kanamycine-vancomycine pour la croissance des anaérobies, en particulier Bacteroides sp.
-Pour l'entretien des souches non exigeantes (Bacterioteca).
-Comptage microbien aérobie dans l'étude des limites microbiennes d'échantillons d'eau, d'environnement, d'aliments et de cosmétiques.
Les échantillons peuvent être semés directement sur la surface de la Trypticasein Soy Agar additionnée de sang ou d'autres additifs. Il est semé d'épuisement.
Alors que les plaques de gélose trypticaséine soja sans additifs sont généralement utilisées pour repiquer des souches microbiennes (bactéries ou levures)..
Pour vérifier la stérilité des différents milieux préparés avec de la gélose à base de trypticaséine soja, il est recommandé de faire ce qui suit: à partir de chaque lot préparé, 1 ou 2 plaques ou tubes non inoculés doivent être incubés à 37 ° C pendant 24 heures pour démontrer leur stérilité. Dans tous les cas il doit rester sans croissance.
En cas de contamination, le lot entier doit être jeté..
Les souches bactériennes suivantes peuvent être utilisées pour étudier le bon fonctionnement de la gélose trypticaséine soja: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 et Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Les souches sont ensemencées et incubées en aérobiose à 37 ° C pendant 24 heures.
Dans tous les cas, la croissance doit être satisfaisante.
Les champignons tels que Complex peuvent également être utilisés Candida albicans ATCC 10231 et Aspergillus niger ATCC 16404. Une bonne croissance est attendue pour les deux souches.
Les souches suivantes peuvent être utilisées pour vérifier le bon fonctionnement de la gélose au sang préparée avec cette base: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 et Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Ils sont ensemencés et incubés à 37 ° C en microaérophilie pendant 24 heures..
Dans tous les cas, la croissance doit être satisfaisante, compte tenu du fait qu'en S. pyogenes une bêta-hémolyse (halo clair autour de la colonie) doit être observée et dans les deux souches de S. pneumoniae une hémolyse alpha (halo verdâtre autour des colonies) doit être observée.
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