le gélose au sulfite de bismuth est un milieu de culture solide, sélectif et différentiel, spécialement formulé pour l'isolement de Salmonella enterica sous-groupe enterica sérotype Typhi, parmi d'autres espèces de Salmonella. Le milieu est connu sous le nom d'agar BSA pour son acronyme en anglais Bismuth Sulfite Agar..
La formule originale de la gélose au sulfite de bismuth a été créée en 1927 par Wilson et Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Celui-ci contenait du sulfite de sodium, du glucose, une solution de bismuth, du citrate d'ammonium, du sulfate ferreux et de l'agar-agar..
Aujourd'hui, il existe une modification du milieu d'origine, composé d'extrait de viande, de peptones de viande et de caséine, d'indicateur de sulfite de bismuth, de glucose, de phosphate disodique, de sulfate ferreux, de vert vif et d'agar-agar..
Il existe de nombreux moyens d'isoler les espèces de Salmonella, mais lorsqu'il s'agit de récupérer le sérotype Typhi, la gélose au sulfite de bismuth présente un avantage notable par rapport à eux, car dans la plupart des cas, une récupération très faible ou nulle de ce microorganisme est obtenue..
Cependant, il est nécessaire d'utiliser plus d'un type de milieu pour tenter d'isoler des entéropathogènes, car la gélose au sulfite de bismuth est moins efficace pour les autres espèces de Salmonella et pour le genre Shigella, qui sont inhibées ou se développent très mal dans cette gélose..
Il est à noter que de toutes les espèces de Salmonella, le sérotype Typhi est l'un des entéropathogènes les plus importants chez l'homme, c'est son seul réservoir. Ce sérovar provoque la fièvre typhoïde, la gastro-entérite, la bactériémie et la septicémie..
Pour cette raison, il est pertinent d'inclure cette gélose lors de l'analyse d'échantillons d'eau, de matières fécales ou d'aliments où sa présence est suspectée..
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Comme la plupart des milieux de culture, la gélose au sulfite de bismuth contient des nutriments pour favoriser la croissance bactérienne, tels que des peptones et des extraits de viande. De même, le glucose fonctionne comme une source d'énergie et de carbone..
Cependant, toutes les bactéries ne se développeront pas sur ce milieu, car la gélose au sulfite de bismuth est un milieu sélectif. Il contient des composés qui inhibent la croissance des micro-organismes Gram positifs et de certaines bactéries Gram négatives. Ces composés sont: l'indicateur sulfite de bismuth et vert clair.
De son côté, le phosphate disodique maintient l'osmolarité et le pH du milieu.
De plus, la gélose au sulfite de bismuth est un milieu différentiel grâce à la présence de sulfate ferreux, qui montre la formation de HdeuxS. Le HdeuxLe S formé par des bactéries réagit avec le sulfate ferreux et forme un précipité noir insoluble clairement visible.
Enfin, l'agar-agar donne la consistance solide au milieu..
Peser 52,3 g de milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau. Chauffer le mélange à ébullition pendant 1 minute en remuant fréquemment, jusqu'à dissolution complète. Ne surchauffez pas trop. Ce milieu n'est pas autoclavé car une chaleur extrême endommage le milieu de culture..
Laisser refroidir à 45 ° C et agiter avant de servir dans des boîtes de Pétri stériles. Il est recommandé de réaliser des plaques de bonne épaisseur. Pour cela, 25 ml doivent être versés dans chaque assiette. Laissez solidifier. Comme il s'agit d'un milieu non stérilisé, il est normal que son utilisation immédiate soit suggérée.
Cependant, une étude réalisée par D'aoust en 1977, a montré qu'il y a une meilleure récupération de Salmonella typhimurium Oui Salmonella enteritidis à mesure que la gélose au sulfite de bismuth vieillit de façon moyenne, les performances des sérotypes ne sont pas affectées Typhi Oui Paratyphi B.
D'aoust recommande d'utiliser les plaques au jour 4 de la réfrigération, bien qu'il prévienne qu'à mesure que le milieu vieillit, la sélectivité diminue, développant plus facilement des souches de Proteus vulgaris.
Pour cette raison, pour les échantillons hautement contaminés, tels que les matières fécales, il est préférable d'utiliser le milieu fraîchement préparé. Sinon, utiliser au jour 4 de sa préparation. D'autres auteurs recommandent d'utiliser les plaques le lendemain de leur préparation, conservées au réfrigérateur..
Les assiettes réfrigérées doivent être trempées avant utilisation. Le pH du milieu doit être de 7,5 ± 0,2. La couleur du support brut est beige et le support préparé est opalescent gris verdâtre.
Parmi les échantillons qui peuvent être plantés dans ce milieu, il y a des échantillons de matières fécales, d'eau potable ou d'eaux usées et de nourriture..
Pour améliorer les isolats, il est recommandé d'effectuer un traitement de pré-enrichissement en bouillon lactose et après enrichissement en bouillon tétrathionate ou bouillon cystine sélénite, avant de semer sur gélose au sulfite de bismuth..
Les plaques sont incubées à 35 ° C ± 0,2 pendant 24 à 48 heures, en aérobiose.
Les colonies de Salmonella typhi ils sont généralement vus sur cette gélose dans les 24 heures avec un centre noir et entourés d'un halo vert brillant. Alors qu'en 48 heures, ils deviennent complètement noirs en raison de la formation de sulfure d'hydrogène.
Salmonella Paratyphi A il présente des colonies aux caractéristiques variables. Après 18 heures d'incubation, des colonies noires, vertes ou transparentes d'aspect mucoïde peuvent être observées. Alors qu'à 48 heures, ils sont complètement noirs et parfois avec un éclat métallique prononcé..
S. Paratyphi A a tendance à noircir l'environnement autour de la colonie.
Salmonella sp présentent des colonies noires ou gris verdâtre, avec ou sans éclat métallique, et peuvent ou non noircir l'environnement environnant.
Les souches coliformes sont généralement totalement inhibées, mais si elles poussent, elles se développent sous forme de colonies vertes ou brunes opaques sans éclat métallique. Ne tachez pas le milieu autour de la colonie.
-Des inoculums très faibles peuvent provoquer des colonies de Salmonella typhi de couleur vert clair, passe inaperçu et la culture est signalée comme négative.
- La gélose au sulfite de bismuth peut inhiber la récupération de certaines espèces de Salmonella telles que S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Ce milieu inhibe la plupart des espèces du genre Shigella.
- S. Typhi et S. arizonae peut donner des colonies très similaires.
-Coliformes qui produisent HdeuxS tels que Proteus et Citrobacter produisent des colonies similaires à celles de Salmonella, il est donc nécessaire d'effectuer des tests d'identification biochimique.
-De bonnes stries doivent être effectuées pour obtenir des colonies isolées; c'est le seul moyen d'observer les caractéristiques typiques des colonies du genre Salmonella.
Pour le contrôle de stérilité, une plaque non ensemencée est incubée à 37 ° C, on s'attend à ce qu'il n'y ait pas de croissance ou de changement de couleur..
Pour le contrôle qualité, des souches connues telles que:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Il est prévu que Escherichia coli Oui Shigella flexneri sont partiellement inhibées par le développement de colonies brun verdâtre et marron respectivement. Alors que les deux salmonelles doivent avoir un excellent développement avec des colonies noires avec un éclat métallique, et enfin Enterococcus faecalis doit être totalement inhibé.
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