le Gélose TSI o Triple Sugar Iron Agar est un milieu de culture solide qui sert de test biochimique pour guider l'identification initiale des bacilles Gram négatifs. Il est basé sur la mise en évidence de la fermentation des sucres présents et de la production de sulfure d'hydrogène et de gaz.
Sa composition et sa base sont très similaires au test de fer de Kligler, à la différence que ce dernier ne contient que du glucose et du lactose. D'autre part, - comme son nom l'indique - l'agar triple sucre fermentaire contient trois glucides fermentescibles: le glucose, le lactose et le saccharose..
De plus, le milieu TSI contient quatre dérivés protéiques qui en font une gélose très nutritive: extrait de levure, extrait de viande, peptone et protéose peptone. Contient également du sulfate d'ammonium ferreux, du thiosulfate de sodium, du chlorure de sodium, du rouge de phénol et de la gélose.
L'incapacité d'un microorganisme à fermenter le glucose présent dans le milieu l'exclut immédiatement d'appartenir à la famille des entérobactéries. Par conséquent, ce test est essentiel pour décider de la voie d'identification à suivre pour déterminer le genre et l'espèce..
Chaque laboratoire décide de travailler avec la gélose TSI ou avec la gélose au fer Kligler..
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Chacun des composés remplit une fonction au sein du milieu.
Le chlorure de sodium est nécessaire pour maintenir l'équilibre osmotique du milieu. Alors que l'agar lui donne la consistance solide.
Le pH du milieu préparé est équilibré à 7,3 et l'indicateur de pH (rouge phénol) devient jaune en dessous de 6,8. Cela signifie que de petites quantités d'acides produites par la fermentation des sucres feront passer le milieu du rouge-orange au jaune..
Si la fermentation ne se produit pas, il y aura alcalinisation du milieu par l'utilisation de peptones, passant du rouge-orange au rouge intense.
Lorsque les bactéries métabolisent les protéines présentes dans la gélose TSI, des amines sont produites qui alcalinisent le milieu (principalement au niveau du biseau), car la réaction nécessite de l'oxygène. Les amines font tourner la lunette en rouge vif.
Mais cela dépendra de la capacité des bactéries à fermenter les glucides ou non..
L'étude de la fermentation des sucres peut donner plusieurs images et chacune est interprétée différemment. L'interprétation du test divise les micro-organismes en 3 catégories: les non-fermenteurs de glucose, les non-fermenteurs de lactose et les fermenteurs de lactose / saccharose..
Il est à noter que la quantité de glucose dans le milieu est limitée, tandis que la concentration de lactose et de saccharose est 10 fois plus élevée..
Les bactéries de la famille des entérobactéries et d'autres micro-organismes fermentant le glucose commenceront à fermenter ce sucre car il s'agit du glucide le plus simple pour l'énergie..
D'autre part, le lactose et le saccharose sont des glucides complexes qui doivent être décomposés et convertis en glucose pour entrer dans le cycle Embden-Meyerhof..
Lorsque le microorganisme inoculé n'est pas capable de fermenter le glucose, il sera encore moins capable de fermenter d'autres glucides. Par conséquent, aucun acide ne se forme ici, mais il y a formation d'amines dans le biseau en raison de l'utilisation de peptones.
Dans ce cas, la lunette vire au rouge plus fort et le fond du tube peut rester inchangé ou il peut également être alcalinisé, laissant tout le tube rouge..
Interprétation: K / K signifie biseau alcalin / fond alcalin ou neutre
Dans l'image au début de l'article voir l'image du tube D.
Ce résultat indique que le microorganisme n'appartient pas à la famille des entérobactéries..
Si les bactéries sont capables de fermenter le glucose mais pas le lactose ou le saccharose, les événements suivants se produiront:
Les bactéries consommeront tout le glucose présent après environ 6 à 8 heures, pouvant acidifier à la fois le biseau et le bloc; c'est-à-dire que la gélose aura complètement viré au jaune. Mais lorsque le glucose est épuisé et l'incapacité d'utiliser le lactose et le saccharose, les bactéries commencent le métabolisme des protéines.
Cette réaction a besoin d'oxygène, donc la dégradation des peptones se produit en surface (biseau). Les amines produites alcalinisent la lunette en passant du jaune au rouge. Cette réaction est mise en évidence après 18 à 24 heures d'incubation..
Interprétation: K / A signifie biseau alcalin et bourre d'acide.
Dans l'image au début de l'article voir l'image du tube B.
Les micro-organismes capables de fermenter le lactose et le saccharose peuvent évidemment fermenter le glucose. Une fois la quantité minimale de glucose présente dans le milieu épuisée, le pyruvate formé commence à se métaboliser pour former des acides à travers le cycle aérobie de Krebs, et dans la période de 8 à 12 heures, tout le milieu sera jaune.
Si la bactérie est capable de décomposer le lactose ou le saccharose, des acides continueront à être produits, et après 18 à 24 heures, tout le tube - biseau et bouchon - continuera à jaunir.
Il est à noter que l'utilisation du glucose se fait de deux manières: l'une en aérobie au biseau du tube, et l'autre en anaérobie au fond du tube..
Interprétation: A / A signifie biseau acide / fond acide. Peut ou peut ne pas présenter de gaz.
Dans l'image au début de l'article voir l'image du tube A.
Certains micro-organismes sont capables de produire du gaz lors de la fermentation des sucres. Le gaz est mis en évidence dans le tube par la pression qu'il exerce à l'intérieur de la gélose. La pression provoque la formation de bulles ou le déplacement de la gélose. Parfois, la formation de gaz peut fracturer le milieu.
Il est important que lors du semis du milieu TSI, la ponction soit faite proprement par le centre de la gélose jusqu'à ce qu'elle atteigne le fond. Si la ponction est détournée vers les parois du tube, elle peut provoquer des faux positifs dans la production du gaz, car elle s'échappera par le canal mal formé..
La production de gaz, ainsi que les réactions qui se produisent dans le biseau de gélose, ont besoin d'oxygène.Il est donc recommandé de recouvrir le tube d'un bouchon de coton et, si un bouchon en bakélite est utilisé, il ne doit pas être complètement étanche..
La production de gaz est signalée comme positive (+) ou négative (-).
Les bactéries capables de produire du sulfure d'hydrogène (gaz incolore) absorbent le soufre du thiosulfate de sodium présent dans le milieu. Une fois le HdeuxS réagit avec le sulfate d'ammonium ferreux, produisant du sulfure de fer (précipité noir clairement visible).
La production de HdeuxS est signalé comme positif (+) ou négatif (-).
Dans l'image au début de l'article voir l'image du tube C.
Peser 62,5 g du milieu de gélose déshydratée triple sucre fer (TSI) et dissoudre dans un litre d'eau distillée..
Chauffer jusqu'à ce que la gélose soit complètement dissoute. Faire bouillir pendant une minute en remuant fréquemment. Répartir 4 ml de milieu dans des tubes à essai 13/100 avec des bouchons en coton.
Stériliser dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Retirer de l'autoclave et laisser reposer à un angle. Il faut veiller à ce que la base et la lunette aient la même distance.
A conserver au réfrigérateur entre 2 et 8 ° C. Laisser réchauffer avant de semer la souche bactérienne.
La couleur du milieu déshydraté est beige clair et le milieu préparé est rouge-orange.
Le pH final du milieu préparé est de 7,3 ± 0,2.
Le test TSI est largement utilisé au niveau des laboratoires de microbiologie. Ce test est essentiel pour guider le type de test qui doit être appliqué pour parvenir à l'identification du genre et de l'espèce. Sa bonne exécution et son interprétation peuvent économiser du matériel et du travail.
Si le résultat est un TSI K / K et que le test de la cytochrome oxydase est positif, il est connu que des tests doivent être utilisés pour l'identification des bâtonnets Gram négatifs non fermentants, tels que Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, entre autres genres. S'il est oxydase négatif, il est orienté vers les genres Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc..
En revanche, si un TSI A / A ou K / A est obtenu et que le test cytochrome oxydase est négatif, plus les nitrates se réduisent en nitrites, on sera sûr qu'il s'agit d'un microorganisme appartenant à la famille des Enterobacteriaceae. Dans ce cas, la voie d'identification se concentrera sur des tests spécifiques pour ce groupe de bactéries..
En revanche, si une image K / A ou A / A est obtenue et que le test cytochrome oxydase est positif, les tests complémentaires à assembler viseront à l'identification des souches en fermentation n'appartenant pas à la famille des entérobactéries, telles comme: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio et Pasteurella.
Une STI avec du sulfure d'hydrogène, oxydase négative, guidera l'identification des genres suivants de la famille des Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella ou Salmonella.
Une STI avec peu ou modérée de sulfure d'hydrogène dans le biseau alcalin avec un fond alcalin et une oxydase positive, guidera l'utilisation des tests pour l'identification des bacilles Gram négatifs non fermentants produisant du HdeuxOui, tout comme Shewanella putrefaciens.
Enfin, le TSI peut être utilisé pour l'investigation de la production de sulfure d'hydrogène chez les bacilles Gram positifs, en particulier lorsqu'il est suspecté de Erysipelothrix rhusiopathiae.
Le milieu TSI doit être inoculé avec des colonies pures, isolées en cultures primaires ou sélectives. Si la colonie est prélevée sur des milieux sélectifs qui ont été ensemencés avec des échantillons de flore mixte, il faut prendre soin de ne prélever qu'à la surface, car des souches viables inhibées dans ce milieu peuvent exister dans la partie inférieure de la colonie..
Par conséquent, la boucle ne doit jamais être refroidie sur un milieu sélectif pour prendre plus tard la colonie et inoculer un milieu TSI..
L'ensemencement se fera avec une boucle droite ou une aiguille. Une crevaison sera faite en veillant à ce qu'elle passe par le centre du milieu jusqu'à atteindre le fond, puis l'ensemencement est terminé en inoculant la surface en forme de zigzag. Ne faites pas deux crevaisons.
Incuber à 37 ° C en aérobiose pendant 18 à 24 heures. Interpréter dans ce temps, ni avant ni après.
Le test TSI doit être lu dans les 18 à 24 heures suivant l'incubation. Une lecture avant cette heure peut donner un faux positif pour la fermentation A / A. Alors qu'une lecture après ce temps peut donner lieu à une fausse image négative d'un non-fermenteur, en raison de la consommation de peptones qui alcalinisent le milieu..
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