le bouillon de sélénite C'est un milieu de culture liquide sélectif. Il a été conçu par Leifson pour l'enrichissement d'échantillons où la présence de bactéries entéropathogènes du genre Salmonella est suspectée..
Ce milieu est conforme aux exigences de l'American Public Health Association (APHA), et est donc accepté pour l'investigation de la présence de Salmonella dans des échantillons de selles, d'urine, d'aliments liquides ou solides, d'eau, entre autres..
Sa composition chimique favorise la récupération de ces micro-organismes et inhibe à son tour la croissance des autres. Il est principalement toxique pour la plupart des bactéries appartenant à la famille des entérobactéries. Cependant, il permet également la récupération des souches de Shigella et n'inhibe pas la croissance de Pseudomonas et Proteus..
Il est composé de sélénite d'hydrogène de sodium anhydre, de phosphate de sodium anhydre, de peptones et de lactose. Il existe également une variante à laquelle la cystine est ajoutée, d'où son nom de bouillon sélénite-cystine..
Actuellement, l'utilisation de bouillon sélénite-cystine est préférée, car on obtient un pourcentage plus élevé de récupération de Salmonella, équivalent à celui observé avec d'autres milieux sélectifs dans le même but, comme le bouillon au tétrathionate de sodium..
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Les peptones contenues dans le bouillon servent de nutriments pour le bon développement des micro-organismes. Les souches de Salmonella utilisent des peptones comme source d'azote, de vitamines et d'acides aminés.
Le lactose est le glucide fermentescible, tandis que le sélénite de sodium est la substance inhibitrice qui arrête la croissance des bactéries Gram positives et de la plupart des bactéries présentes dans la flore intestinale, en particulier celles de la famille des Enterobacteriaceae. Le phosphate de sodium est le tampon qui stabilise le pH du milieu.
Dans le cas de la variante de bouillon de sélénite contenant de la L-cystine, ce composé supplémentaire est un agent réducteur qui minimise la toxicité du sélénite, augmentant la récupération de Salmonella..
Si vous avez les composants du mélange, vous pouvez peser:
4 g d'hydrogénosélénite de sodium anhydre.
10 g de phosphate de sodium anhydre.
5 grammes de peptones.
4 g de lactose.
Dissoudre les composés dans 1 litre d'eau distillée stérile. Il peut être légèrement chauffé pour se dissoudre complètement.
Certains laboratoires exposent le milieu pendant 10 minutes à la vapeur courante pour le stériliser, car un autoclave ne doit pas être utilisé. Si le milieu est stérilisé, il peut être conservé au réfrigérateur jusqu'à son utilisation..
Il peut également être préparé non stérile et servi directement de 10 à 15 ml dans des tubes à essai stériles.
Dans ce cas, il doit être laissé reposer et utiliser immédiatement. Le milieu n'étant pas stérile, il ne peut pas être conservé au réfrigérateur pour une utilisation ultérieure..
Si le milieu commercial est disponible, peser 23 g du milieu déshydraté et le dissoudre dans un litre d'eau distillée stérile. Chauffer brièvement pour terminer la dissolution. Ne pas autoclave. Servir aseptiquement 10 ou 15 ml dans des tubes à essai stériles.
Le pH final du milieu doit être de 7,0 ± 0,2.
Il est à noter que la couleur du milieu déshydraté est beige et la préparation est ambre clair et translucide..
Il contient les mêmes composés que le bouillon de sélénite, mais 10 mg de cystine sont ajoutés. Le reste de la procédure est exactement le même que celui décrit ci-dessus.
Ce milieu est spécial pour être utilisé dans les études épidémiologiques, dans les cas où la maladie n'est pas à son stade aigu, des patients asymptomatiques ou des porteurs sains.
L'isolement du genre Salmonella est généralement difficile, car il ne s'agit normalement que d'échantillons peu contaminants. Étant en petite quantité, il est facilement chevauché par la croissance d'autres genres bactériens qui se trouvent en plus grande quantité..
D'autre part, la matière première avec laquelle les aliments transformés sont fabriqués est souvent exposée à la chaleur, aux processus de déshydratation, à l'utilisation de désinfectants, aux rayonnements et aux conservateurs, entre autres..
Par conséquent, les salmonelles présentes dans la matière première sont abusées en soumettant le produit aux procédés industriels susmentionnés. De même, dans le cas d'échantillons cliniques tels que les matières fécales, les souches peuvent être faibles si elles proviennent de patients qui ont été traités avec des antibiotiques..
Par conséquent, tout échantillon dans lequel la présence de Salmonella est suspectée doit être pré-enrichi en bouillon de lactose, puis enrichi en bouillon de sélénite pour optimiser sa récupération dans des milieux sélectifs, tels que la gélose SS, la gélose au xylose, le désoxycholate de lysine (XLD), entérique Agar Hektoen (HE) et gélose vert clair, entre autres.
Pour les échantillons de selles, prélever 1 g d'échantillon et mettre en suspension dans un tube avec 10 à 15 ml de bouillon de sélénite. Si les selles sont liquides, prélever 1 ml et mettre en suspension dans le bouillon. Pour les écouvillons rectaux, évacuez le matériau de l'écouvillon dans le bouillon.
Dans les échantillons d'aliments solides, prélever 1 gr et mettre en suspension dans le bouillon de sélénite.
Dans les aliments liquides, mélanger à parts égales avec le bouillon de sélénite à double concentration.
Pour les échantillons d'urine, centrifuger, jeter le surnageant, prélever tout le sédiment et le mettre en suspension dans le bouillon de sélénite..
Les bouillons sont incubés à 37 ° C pendant 24 heures d'incubation. La croissance bactérienne est mise en évidence par la turbidité. Un tube supplémentaire par échantillon peut également être inclus pour une incubation à 42 ° C. Par la suite, ensemencer un milieu solide sélectif à partir du bouillon de sélénite.
Pour contrôler la stérilité, un bouillon de sélénite de chaque lot non inoculé est incubé à 37 ° C pendant 24 heures. Aucune turbidité ou changement de couleur du support n'est attendu..
Pour contrôler le bon fonctionnement du milieu, des souches connues peuvent être utilisées, telles que:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 et Proteus mirabilis ATCC 43071.
Les résultats attendus sont:
Le milieu de bouillon de sélénite est toxique pour la peau humaine, donc le contact direct doit être évité..
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