le bouillon de soja tryptique C'est un milieu de culture liquide, hautement nutritif et non sélectif. En raison de sa grande polyvalence, c'est l'un des milieux de culture liquides les plus utilisés dans le laboratoire de microbiologie..
Il est également connu sous le nom de bouillon tryptique de soja ou de bouillon digéré caséine-soja, dont l'abréviation est TSB pour son acronyme en anglais. Tryptique suis Bouillon ou CST pour son acronyme en espagnol. Ses utilisations sont très variées de par sa composition. Il est composé de triptein, de peptone de soja, de chlorure de sodium, de phosphate dipotassique et de glucose.
Il est capable de reproduire des bactéries pathogènes cliniquement importantes, y compris celles qui sont exigeantes sur le plan nutritionnel et des bactéries anaérobies. Certains champignons opportunistes et contaminants peuvent également se développer dans cet environnement.
En raison de son pouvoir nutritionnel élevé, il a une sensibilité élevée pour détecter la contamination microbienne, c'est pourquoi il a été choisi par le service d'inspection de la santé animale et végétale de l'USDA pour l'analyse microbiologique des vaccins..
De même, le bouillon trypticaséine soja répond aux exigences des différentes pharmacopées (EP européenne, JP japonaise et USP nord-américaine) pour l'étude microbiologique de produits au niveau industriel, tels que les cosmétiques et l'alimentation..
D'autre part, il convient de mentionner que malgré sa grande utilité, ce milieu est relativement peu coûteux, ce qui le rend abordable pour la plupart des laboratoires de microbiologie. Il est également très facile de préparer.
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La triptein, la peptone et le glucose fournissent des propriétés nutritionnelles essentielles pour en faire un milieu idéal pour une croissance microbienne rapide.
En environ 6 à 8 heures d'incubation, la croissance est déjà visible dans la plupart des micro-organismes. Cependant, il existe des variétés à croissance lente qui peuvent mettre des jours à se développer..
Le chlorure de sodium et le phosphate dipotassique agissent respectivement comme équilibre osmotique et régulateur de pH. La présence de croissance est mise en évidence par l'apparition de turbidité dans le milieu; s'il n'y a pas de croissance, le milieu reste translucide.
En raison de sa couleur claire, il est possible d'observer la production de pigments, comme celui montré sur l'image située au début de l'article, qui correspond au pigment produit par Pseudomonas aeruginosa.
Pour préparer le bouillon de soja trypticase, 30 g du milieu commercial déshydraté doivent être pesés sur une balance numérique. Puis il est dissous dans un litre d'eau distillée contenu dans un ballon.
Le mélange est laissé au repos pendant 5 minutes, puis il est porté à une source de chaleur pour aider à dissoudre le milieu. Il doit être remué fréquemment en bouillant pendant 1 minute.
Une fois dissous, il est distribué dans des tubes de taille appropriée selon les besoins. Des tubes avec des bouchons en coton ou avec des bouchons en bakélite peuvent être utilisés. Par la suite, les tubes sont stérilisés avec le milieu dans l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes..
Le pH du milieu doit rester à 7,3 ± 0,2
Il est à noter que la couleur du milieu de culture déshydraté est beige clair et doit être conservé entre 10 et 35 ° C, dans un endroit sec. Alors que le bouillon préparé est de couleur ambre clair et doit être conservé au réfrigérateur (2 à 8 ° C).
Le bouillon de soja trypticaséine modifié peut être préparé en ajoutant des sels biliaires et de la novobiocine afin de le rendre sélectif pour l'isolement de E. coli. Une autre option dans le même but consiste à préparer un bouillon de trypticase de soja supplémenté en vancomycine, céfixime et tellurite (2,5 µg / ml)..
En revanche, plus de glucose (0,25%) peut être ajouté au bouillon de soja tryptique lorsque l'objectif est de stimuler la formation de biofilms..
Il est suffisamment nutritif pour permettre la croissance de bactéries exigeantes ou exigeantes telles que Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp et Brucella sp, pas besoin de compléter avec du sang ou du sérum.
De même, certains champignons peuvent se développer dans ce bouillon, tels que Complexe de Candida albicans, Aspergillus sp et Histoplasma capsulatum.
De plus, ce milieu en conditions anaérobies est idéal pour récupérer des bactéries appartenant au genre Clostridium, ainsi que des bactéries anaérobies non sporulées d'importance clinique..
Si du chlorure de sodium à 6,5% est ajouté, il peut être utilisé pour la croissance d'Enterococcus et d'autres streptocoques du groupe D..
Au niveau de la recherche, il a été très utile dans divers protocoles, notamment dans l'étude des biofilms ou des bactéries formant des biofilms. Il est également utilisé pour préparer la suspension bactérienne Mac Farland à 0,5% nécessaire à la réalisation de l'antibiogramme par la méthode Kirby et Bauer..
Dans ce cas, 3 à 5 colonies d'aspect similaire sont prélevées et émulsionnées dans 4 à 5 ml de bouillon trypticaséine soja. Il est ensuite incubé pendant 2 à 6 heures à 35-37 ° C et ensuite ajusté à la concentration souhaitée en utilisant une solution saline stérile. Les bouillons de trypticaséine de soja ne doivent pas être utilisés entre 18 et 24 heures d'incubation.
L'échantillon peut être ensemencé directement ou des colonies pures prélevées sur des milieux sélectifs peuvent être repiquées. L'inoculum doit être petit pour ne pas brouiller le milieu avant l'incubation.
Normalement, il est incubé à 37 ° C en aérobiose pendant 24 heures, mais ces conditions peuvent varier en fonction du microorganisme recherché. Il peut également être incubé en conditions anaérobies à 37 ° C pendant plusieurs jours si nécessaire. Par exemple, dans les micro-organismes exigeants ou à croissance lente, il peut être incubé jusqu'à 7 jours.
Dans l'analyse microbiologique des substances pharmaceutiques - comme les vaccins - les protocoles sont plus stricts. Dans ces cas, le bouillon sans croissance n'est pas jeté jusqu'à ce qu'il atteigne 14 jours d'incubation continue..
De chaque lot préparé, 1 ou 2 tubes non inoculés doivent être incubés pour démontrer leur stérilité. Doit rester inchangé.
Des souches connues peuvent également être plantées pour évaluer leur comportement. Parmi les souches utilisables figurent:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ou 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
Dans tous les cas, la croissance doit être satisfaisante dans les conditions d'atmosphère et de température appropriées pour chaque microorganisme..
-La fermentation du glucose fait baisser le pH du milieu en raison de la production d'acides. Cela peut être défavorable à la survie de certains microorganismes sensibles à l'acidité..
-Il n'est pas recommandé pour l'entretien des souches, car en plus de l'acidité, les bactéries appauvrissent les nutriments après quelques jours avec l'accumulation conséquente de substances toxiques qui rendent l'environnement inhospitalier.
-Vous devez travailler en prenant soin de tous les protocoles de stérilité, car les bouillons sont facilement contaminés.
-Après avoir préparé des bouillons de trypticaséine de soja, vous ne devez pas essayer de transférer le bouillon dans un autre tube stérile, car ce type de manœuvre est très vulnérable à la contamination..
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