le Rouge Congo est un colorant azoïque pour protéines, formé par le couplage d'un sel de diazonium et d'un cycle aromatique actif. Cette substance est capable d'absorber le rayonnement électromagnétique dans le spectre visible, c'est pourquoi elle a une couleur intense.
Il est chargé négativement. Par conséquent, il a une affinité pour les composants cellulaires chargés positivement, tels que certaines substances protéiques. Sa couleur varie en fonction du pH. En ce sens, si le milieu est acide (< de pH3), el color es azul intenso. Entre pH3 - pH 5,2 es fucsia (zona de viraje), y con >pH 5,2 la couleur est rouge foncé.
C'est une substance très polyvalente, car elle a de multiples utilisations. Il a été utilisé comme colorant dans l'industrie textile, ainsi que pour les cellules et les tissus.
Réaliser également des milieux de culture qui mesurent l'action enzymatique, comme indicateur de pH, comme substance de contrôle dans l'évaluation du bon fonctionnement des spectrophotomètres, dans l'étude de la formation de biofilm, ou dans le diagnostic de l'amyloïde..
De même, il a permis de distinguer les sérotypes bactériens et fongiques en identifiant des structures spécifiques dans leur paroi (lipopolysaccharides)..
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Cette substance a été découverte par Böttiger en 1884. C'est un dérivé du diazonium formé par l'acide bis-diazoïque de la benzidine avec l'acide naphtionique. La molécule de rouge Congo mesure 21 Armstrong et le poids moléculaire est d'environ 8000 g / mol..
Le rouge Congo se caractérise par sa solubilité dans l'eau, et plus encore dans les solvants organiques comme l'éthanol, formant une solution colloïdale.
A une affinité pour la cellulose, le tissu amyloïde et les composants cellulaires chargés positivement.
Le rouge Congo est préparé en différentes concentrations en fonction de la technique à utiliser. La plupart utilisent le rouge Congo à 1%, 2%, 0,1%, entre autres.
Par exemple, pour préparer 2% de rouge Congo, il faut peser 2 g de colorant alimentaire déshydraté et ajouter 100 ml d'eau distillée. Ensuite, il est stocké dans une bouteille ambrée.
Pendant un certain temps, il a été largement utilisé dans l'industrie textile en raison de sa fixation sur le coton, mais actuellement il est en désuétude car il est cancérigène et aussi parce que la couleur n'est pas stable, se décolorant par frottement..
Il a été démontré que la capacité de formation de biofilm des micro-organismes est un facteur de virulence.
En ce sens, le colorant rouge Congo est utilisé comme méthode pour déterminer la formation de biofilm. Le rouge Congo se lie aux exopolysaccharides présents dans le biofilm. Cependant, par rapport aux autres méthodes, c'est la moins recommandée en raison des nombreux faux négatifs qui se produisent..
La méthode utilise de la gélose au rouge Congo, elle est composée de gélose au sang comme base, de glucose (10 g / l) et du colorant rouge Congo (0,4 g / l). Les souches à évaluer sont ensemencées dans le milieu et incubées pendant 24 heures à 37 ° C, puis incubées pendant 48 heures à température ambiante..
Un test positif est mis en évidence si des colonies cristallines de couleur noire et d'aspect sec sont observées.
Pour évaluer si un équipement de mesure d'absorbance ou de transaction est conforme aux paramètres photométriques établis par les réglementations internationales, une technique simple peut être utilisée pour déterminer si l'équipement émet des résultats dans les plages d'acceptabilité..
L'une des techniques d'évaluation utilise le rouge Congo, basé sur le point isosbestique.
Le point isosbestique est la longueur d'onde à laquelle le rouge Congo émet la même absorbance indépendamment du pH, de la concentration et de la température. La valeur d'absorbance est fixe et peut être utilisée comme référence.
On sait que le point isosbestique théorique du rouge Congo est de 541 nm. Si la valeur obtenue est différente, on sait que l'équipement a des problèmes de dérive de longueur d'onde, et il doit être vérifié par un technicien spécialisé..
Ortiz et al Décrivent un milieu de culture préparé avec du colorant rouge Congo et de la carboxyméthylcellulose appelé gélose CMC, afin de détecter les souches microbiennes de cellulite; c'est-à-dire les producteurs de cellulase (endoglucones, exoglucanases et ß-glucosidase).
Ce médium a une coloration intense. La couleur sera dissipée par l'action de l'enzyme endoglucanase qui rompt la structure de la carboxyméthylcellulose. Cela suggère une réaction positive.
La diminution de la viscosité et de l'absorbance permet de quantifier l'activité de l'enzyme. Par exemple, dans les souches de Streptomyces sp.
Le rouge Congo a une affinité pour les structures polysaccharidiques de certaines souches, permettant l'identification de ces micro-organismes. Parmi eux se trouvent les Escherichia coli, et la Shigella flexneri.
Des plaques d'agar rouge Congo sont également utilisées pour obtenir des colonies caractéristiques, comme c'est le cas de Azospirillum sp, donnant des colonies rouge écarlate, entre autres.
L'une des applications les plus courantes du rouge Congo est son utilité dans le diagnostic de l'amylose. Cette étrange maladie consiste en l'accumulation extracellulaire d'une protéine anormale dans divers organes. Cette protéine anormale est fabriquée dans la moelle osseuse et est appelée amyloïde..
Le rouge Congo a une forte affinité pour cette substance. Cette propriété a été utilisée pour montrer sa présence dans des coupes de tissus histologiques. Le rouge Congo est utilisé en conjonction avec l'hématoxyline / éosine à cette fin..
L'union du tissu amyloïde et du rouge Congo se produit par des liaisons hydrogène non polaires, entre les groupes carboxyle et le groupe amino. La protéine amyloïde fournit les groupes carboxyle (COOH) et le rouge Congo le groupe amino.
Le tissu amyloïde est coloré dans diverses teintes allant du rose au rouge foncé au microscope optique. Dans les microscopes à lumière polarisée double, ces préparations sont observées avec une biréfringence pathognomonique vert pomme..
Autrement dit, ils présentent un dichroïsme, car les fibres amyéloïdes sont anisotropes. Cette observation confirme le diagnostic.
La coloration des tissus au rouge Congo est compatible avec d'autres méthodologies de diagnostic, telles que les méthodes immunocytochimiques, et il est même possible de recolorer.
La propriété de se retourner contre les changements de pH est utilisée par la technique appelée chromoendoscopie..
Cette technique utilise des colorants et des indicateurs de pH qui permettent la détection de certaines pathologies. Parmi eux, l'utilisation du rouge Congo, qui peut révéler des foyers de cancer précoces dans la muqueuse gastrique, étant utilisé comme marqueur de l'acidité.
La technique est basée sur le fait que le rouge Congo à pH acide est noir. Par conséquent, après avoir placé une solution de rouge Congo sur la muqueuse gastrique, les zones où il y a de la pâleur seront choisies pour prélever l'échantillon pour la biopsie, c'est-à-dire où il n'y a pas de production d'acide. Cela suggère la présence d'un foyer cancéreux ou la perte de cellules pariétales..
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