Rose du Bengale Il s'agit d'un test de laboratoire basé sur une réaction antigène-anticorps pour le diagnostic de la brucellose. La technique permet la détection d'anticorps spécifiques contre les bactéries Brucella abortus dans des échantillons de sérum humain. Le résultat peut être rapporté qualitativement ou semi-quantitativement.
La forme qualitative exprime si le patient est positif ou négatif pour le test, c'est-à-dire s'il y a ou non des anticorps. Pendant ce temps, le rapport semi-quantitatif est indiqué en UI / ml et indique la quantité approximative d'anticorps présents. Il est à noter que les anticorps ne seront produits que si le patient a été en contact avec le micro-organisme.
En raison de sa grande simplicité, de sa grande sensibilité et de sa spécificité, c'est l'une des techniques de séroagglutination les plus utilisées en médecine comme test initial pour le diagnostic de cette maladie..
Certains chercheurs ont comparé l'efficacité du test Rose Bengal avec d'autres techniques, telles que la séroagglutination (antigènes fébriles) et ont observé que bien qu'il y ait une bonne corrélation, ils ont vu des cas isolés dans lesquels le test d'antigène fébrile était négatif et la poussée de Rose de Positive.
La différence obtenue était due au fait que ces patients avaient une sous-classe d'anticorps IgG contre Brucella abortus avec une meilleure capacité de liaison à pH acide, ils pourraient donc réagir avec le réactif Rose Bengal mais pas avec celui des antigènes fébriles.
En ce sens, ils ont suggéré que les réactifs de la technique des antigènes fébriles soient modifiés à un pH acide afin de pouvoir détecter ce type de cas..
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Le réactif Rose Bengal se compose d'une suspension antigénique. Il est composé de la souche S99 de Brucella abortus, dilué dans un tampon lactate acide (pH 3,6), plus du phénol et le colorant Rose Bengal.
Par conséquent, dans l'échantillon ce qui est recherché sont des anticorps anti-Brucella, s'ils sont présents, ils réagiront avec l'antigène réactif et une réaction d'agglutination visible macroscopiquement sera observée. Le test détecte des anticorps IgM ou des anticorps IgG.
Cela signifie qu'il peut détecter la maladie à la fois dans son stade aigu où les anticorps IgM prévalent ou dans son stade chronique où les anticorps IgG prédominent..
Ceci représente un avantage car cela augmente la sensibilité du test mais en même temps c'est un inconvénient car il ne fait pas de distinction entre une étape et une autre, car la réaction avec les anticorps IgM et IgG est identique.
Le test doit toujours être effectué avec un contrôle négatif et un contrôle positif. Le contrôle négatif contient du sérum animal sans anticorps et le contrôle positif contient du sérum d'origine animale avec 50 UI / ml d'anticorps anti-Brucella..
La brucellose est une maladie grave qui a tendance à être chronique et dangereuse, il est donc très important qu'elle soit diagnostiquée tôt. C'est une zoonose et les humains peuvent être infectés par contact direct avec du matériel contaminé, les personnes les plus vulnérables étant les vétérinaires et les éleveurs..
L'infection peut également survenir en consommant de la viande crue infectée, entre autres formes de contagion.
Cette maladie attaque localement ou systématiquement. La forme systémique est la plus grave, car divers organes peuvent être affectés, y compris le système endothélial du réticulum (foie, rate, moelle osseuse), la peau (cellulite et lymphadénopathie), le système respiratoire (pneumonie), le système musculo-squelettique (arthrite, sacroiliite et spondylite) ), entre autres.
Le test Rose Bengal est une technique très utile pour effectuer un premier dépistage, car il est très peu coûteux, facile à utiliser et avec une grande spécificité et sensibilité..
Les cas de faux négatifs et de faux positifs sont très rares et peuvent survenir chez les personnes ayant des titres d'anticorps très faibles (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 UI / ml) respectivement.
-Kit Rose Bengale
-Plaque d'agglutination fond blanc
-Pipette de 50 µl
-Rotateur (facultatif)
-Vortex
Les kits commerciaux Rose Bengal sont livrés avec des réactifs prêts à l'emploi.
-Tempérer les réactifs avant de commencer le travail.
-Les plaques d'agglutination ont des cercles dessinés, chacun pour un échantillon différent. Utilisez 3 cercles, le premier pour le contrôle négatif, le second pour l'échantillon et le troisième pour le contrôle positif.
-Placer une goutte ou 50 µl des contrôles et de l'échantillon dans leur cercle correspondant.
-Mélangez le réactif Rose Bengal à l'aide d'un vortex. Placez une goutte à côté de celles précédemment placées.
-Mélanger avec des cure-dents en bois (en utiliser un pour chaque échantillon ou contrôle). Faites des mouvements circulaires et étalez-vous de manière à couvrir tout le cercle.
-Placer la plaque sur un rotateur automatique à 80 à 100 tr / min ou faire tourner manuellement pendant 4 minutes. Lisez la preuve à la fin de ce temps.
-Vérifiez que les contrôles ont donné comme prévu. Comparez la réaction de l'échantillon à tester avec les contrôles. Signaler comme positif si une agglutination est observée et comme négatif s'il n'y a pas d'agglutination.
Un test positif indique que le patient a une quantité égale ou supérieure à 25 UI / ml d'anticorps anti-Brucella.
Si dans la réaction qualitative l'échantillon est fortement positif, il peut être semi-quantifié. Pour cela, des doubles dilutions en série de l'échantillon sont effectuées avec une solution saline physiologique. La procédure décrite ci-dessus est effectuée à chaque dilution..
Elle est également interprétée en observant l'agglutination macroscopiquement. Le résultat sera le titre de la dilution la plus élevée dans laquelle un résultat positif a été observé.
Pour calculer la valeur approximative des anticorps anti-Brucella, la formule suivante est utilisée:
25 UI / ml x titre de réaction = UI / ml
Exemple, si un patient dans le test semi-quantitatif est positif à la dilution ½, ¼ et 1/8 et commence à être négatif à partir de la dilution 1/16, cela signifie que le patient a un titre de 8.
Application de la formule:
25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml
-Les kits ont une date d'expiration et celle-ci doit être respectée. Ne doit pas être utilisé si le réactif est périmé.
-Pendant l'utilisation, assurez-vous que le réactif ne contient pas de particules solides, car c'est un signe de détérioration..
-Conserver entre 2 et 8 ° C.
-Ne pas congeler, cet acte endommage irrémédiablement le réactif.
-Exécutez toujours le test avec les contrôles négatifs et positifs.
-La technique tolère des échantillons de sérum avec un certain degré de lipémie et d'hémolyse, mais il n'est pas conseillé d'utiliser des sérums exagérément lipémiques et hémolysés, les deux conditions altérant les résultats du test..
-Réchauffez toujours les réactifs à température ambiante avant de commencer l'analyse..
-Ne pas interpréter les réactions qui prennent plus que le temps recommandé, car cela génère le rapport de faux positifs, car après un certain temps, le réactif précipite, simulant une réaction positive.
-La technique est 100% sensible et a une spécificité de 98%.
-Après une semi-quantification de 1000 UI / ml il y a la possibilité d'observer un effet prozone (faux négatif en raison d'un excès d'anticorps par rapport à la quantité d'antigènes).
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