le Gélose BIGGY C'est un milieu de culture solide, sélectif et différentiel. Il a été conçu pour isoler et aider à l'identification des principales espèces de Candida. Son nom BIGGY vient de l'acronyme en anglais Bismuth Glucose Glycine Yeast.
La formule originale a été créée par Nickerson, c'est pourquoi ce milieu est également connu sous le nom d'agar Nickerson. Actuellement, il est composé d'extrait de levure, de glycine, de dextrose, de citrate d'ammonium, de citrate de bismuth, de sulfite de sodium et d'agar..
La gélose BIGGY est formulée pour la différenciation des espèces Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei et C. kefyr, mais d'autres espèces poussent aussi comme Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum et Saccharomyces cerevisiae.
Il a une bonne sensibilité et spécificité, cependant, comparé à d'autres supports ayant une fonction similaire, il est en deuxième position, dépassé par CHROMagar. Pour cette raison, de nombreux laboratoires préfèrent ce dernier, bien qu'il soit beaucoup plus cher..
Il doit être clair que l'utilisation de BIGGY Agar, ainsi que d'autres moyens similaires, permet une identification présomptive rapide, mais jamais de confirmation. Par conséquent, des méthodes d'identification supplémentaires doivent être disponibles; par exemple, les systèmes d'identification Vitek 32 et API 20.
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La gélose BiGGY est considérée comme un milieu partiellement sélectif pour l'isolement des levures, en particulier du genre Candida, bien que d'autres genres puissent se développer.
C'est aussi un milieu différentiel car selon les espèces impliquées, différentes caractéristiques seront observées en termes d'apparence, de couleur, de forme et de taille. Il est considéré comme un milieu chromogène, en raison du développement de diverses couleurs dans les colonies.
La couleur des colonies de levure est due à la présence de sulfite de bismuth dans la gélose. Nickerson s'est rendu compte que les levures du genre Candida effectuent une réduction extracellulaire du sulfite de bismuth, le transformant en sulfure de bismuth (une substance noire insoluble). Il en résulte des colonies marron clair à noires..
Cette gélose contient de l'extrait de levure et du dextrose, qui fournit la source de nutriments de base et d'énergie pour le développement de la levure. La glycine est un stimulant de la croissance des levures, tout en inhibant la croissance de certaines bactéries.
Dans ce même sens, le citrate d'ammonium et de bismuth, ainsi que le sulfite de sodium agissent comme des inhibiteurs de la croissance bactérienne. L'agar est l'agent qui donne la consistance solide moyenne.
Peser 45 g du milieu de culture déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Secouez et chauffez le mélange en faisant bouillir pendant 1 minute jusqu'à dissolution complète. Ce milieu de culture n'est pas autoclavable.
Lors du refroidissement à environ 45 ° C dans un bain-marie, verser 20 ml sur des boîtes de Pétri stériles..
La couleur du milieu déshydraté est gris jaunâtre et préparé est un gel blanc jaunâtre, dans lequel un léger précipité floculant peut être observé.
Le pH doit être de 6,8 ± 0,2.
Le milieu préparé doit être conservé au réfrigérateur (4 ° C) et à l'abri de la lumière. Comme il s'agit d'un milieu qui ne peut pas être autoclavé, il doit être utilisé dès que possible. Son utilisation est recommandée dans les 3 jours suivant sa préparation.
Les plaques sont incubées à température ambiante (25 ° C) pendant 24, 48 et 72 heures, et le temps d'incubation peut être prolongé jusqu'à 5 jours..
Chaque espèce de Candida développe certaines caractéristiques qui se distinguent les unes des autres. Les fabricants du milieu décrivent les caractéristiques suivantes pour chaque espèce:
-Complexe de Candida albicans: se développe sur cette gélose sous forme de colonies lisses, rondes, brunes ou noires, avec une légère bordure mycélienne. À l'exception du fait que la couleur foncée ne diffuse pas sur le support.
-Candida tropicalis: les colonies sont claires, petites, brun foncé, avec un centre noir et une légère bordure mycélienne. La couleur sombre diffuse vers le milieu, caractéristique typique de cette espèce, après avoir été incubée pendant 72 heures..
-Candida krusei développe de grandes colonies plates et rugueuses avec une bordure brune à noirâtre.
-Candida parakrusei: colonies de taille moyenne, la plupart du temps rugueuses, plates. La couleur peut varier du brun rougeâtre foncé brillant au brun rougeâtre clair. La bordure des colonies a un mycélium jaunâtre étendu.
-Candida stellatoidea: Développe des colonies moyennes, plates, brun foncé, presque noires. Le développement mycélien est très rare.
Une étude réalisée par Yücesoy et Marol en 2003, a montré que le milieu CHROMagar a une meilleure sensibilité et spécificité pour la différenciation et l'identification des différentes espèces de Candida que la gélose BIGGY..
Pour le contrôle de stérilité, les plaques non inoculées sont incubées à 25 ° C, dans l'obscurité pendant 24 à 48 heures, on s'attend à ce qu'il n'y ait pas de croissance d'aucune sorte, ni de changement de couleur..
Les souches ATCC recommandées pour le contrôle qualité du milieu sont:
Complexe de Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Pour tous, la croissance est attendue comme décrit ci-dessus..
Les souches suivantes peuvent également être utilisées:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 et Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Dans les deux premiers, une inhibition totale est attendue, mais en cas de croissance partielle des colonies, elles seront de couleur crème..
Dans le cas de S. aureus on s'attend à ce qu'il soit totalement inhibé, mais s'ils se développent partiellement, leurs colonies sont blanches.
Certaines bactéries sont capables de se développer dans ce milieu et peuvent même devenir de couleur sombre, simulant une colonie de Candida, mais en faisant un frottis de la colonie et en l'observant au microscope, elle est facilement jetée..
Tableau: Caractéristiques des colonies de certaines levures sur gélose BIGGY d'après les travaux de Yücesoy M et Marol S.
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