le Gélose Czapek (CZA) est un milieu de culture solide sélectif spécialement conçu pour la culture de bactéries et champignons saprophytes. Il a été créé par le botaniste Friedrich Johann Franz Czapek, d'origine polonaise, et le chimiste américain Arthur Wayland Dox; Pour cette raison, cette gélose est également connue sous le nom de milieu Czapek-Dox..
Le milieu d'origine était liquide, mais de la gélose a ensuite été ajoutée pour en faire un milieu solide. Le milieu Czapek est composé de nitrate de sodium, de phosphate bipotassique, de sulfate de magnésium, de chlorure de potassium, de sulfate ferreux, de saccharose, de gélose et d'eau distillée..
Le pH de la gélose Czapek est de 7,3, mais il existe une variante à laquelle on ajoute 10% d'acide lactique dont le pH reste à 3,5. Ce milieu acide est utilisé pour la culture de microorganismes acidophiles.
D'autre part, certaines maisons commerciales ont modifié la composition de la gélose Czapek en changeant le sulfate de magnésium et le phosphate bipotassique par du glycérophosphate; cette modification empêche la formation du précipité de phosphate de magnésium observé avec la formule classique. De même, il existe une autre variante à laquelle est ajouté un extrait de levure.
Enfin, la gélose Czapek est recommandée par l'American Public Health Association APHA pour l'étude de Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Oui Penicillium sp. Ces espèces se caractérisent par le fait qu'elles sont des microorganismes environnementaux et des agents pathogènes opportunistes..
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Ce milieu contient du saccharose; Ce glucide sert de source de carbone, tandis que le nitrate de sodium est la source d'azote, mais contrairement à d'autres milieux, l'azote fourni est inorganique..
Pour cette raison, le milieu Czapek est considéré comme sélectif, car seuls les micro-organismes capables d'utiliser des composés inorganiques comme seule source d'azote peuvent se développer..
Le phosphate bipotassique est un régulateur de l'osmolarité du milieu. De leur côté, le sulfate de magnésium, le chlorure de potassium et le sulfate ferreux fournissent des minéraux essentiels à la croissance des microorganismes saprophytes (libres). Avec cette formule, un précipité de phosphate de magnésium se forme.
Enfin, l'agar-agar est le composé qui confère la consistance solide au milieu et l'eau est le solvant de tous les composants..
Avec la formule d'agar Czapek modifiée, il n'y a pas de formation de précipité et elle améliore les performances de croissance de certains champignons.
L'acidité extrême de l'Acid Czapek Agar en fait un milieu plus sélectif, ne permettant que la croissance de microorganismes acidophiles, capables d'utiliser de l'azote inorganique. Alors que la gélose Czapek-levure améliore les performances de certains champignons.
Peser 49 g du milieu de culture déshydraté et dissoudre dans l'eau distillée. Chauffez jusqu'à ébullition. Secouez le mélange fréquemment jusqu'à dissolution complète..
Répartir le mélange dissous dans des tubes et autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes. Lors du retrait de l'autoclave, homogénéiser avant de poser les tubes et laisser solidifier.
Autoclave le mélange dissous à 121 ° C pendant 15 minutes et laisser refroidir à 50 ° C, homogénéiser et verser 20 ml dans des boîtes de Pétri stériles. Laisser se solidifier, inverser et conserver au réfrigérateur jusqu'à utilisation.
Le pH doit être de 7,3 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est blanche et le milieu préparé est ambre clair, légèrement trouble du fait de la présence d'un précipité floculant..
Préparer comme déjà décrit, mais en ajoutant 10 ml d'acide lactique stérile à 10% pour chaque litre de milieu préparé. Le milieu Czapek modifié doit rester à pH 3,5 ± 0,2.
Peser 45,4 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau. Le reste de la préparation est le même que celui décrit ci-dessus. La couleur du milieu déshydraté est blanche et le milieu préparé est blanchâtre. Le pH final du milieu est de 6,8 ± 0,2.
Aussi appelé Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Contient les éléments de la gélose Czapek classique plus un extrait de levure.
Le milieu Czapek est utilisé pour rechercher des microorganismes saprophytes dans des échantillons de sol, de légumes, de céréales, d'air, d'insectes, entre autres..
La gélose Czapek à pH acide est utilisée pour la croissance de microorganismes acidophiles, tandis que la gélose Czapek modifiée est particulièrement utile pour la formation de chlamydospores dans les espèces du complexe. Candida albicans.
Enfin, la gélose Czapek-levure est très utile pour l'isolement d'Aspergillus et de Penicillium..
Pour rechercher des Actinomycètes dans le sol, procédez comme suit: l'échantillon est traité avec de l'eau phénolisée pendant 30 min puis 1 mL de la suspension est semé sur gélose Czapek. Incuber à 28 ° C pendant 5 à 7 jours.
Pour les échantillons de légumes, de céréales et d'insectes, ils sont placés directement sur la gélose. Vous pouvez également faire des dilutions et semer 0,1 ml à la surface de la gélose..
Pour l'ensemencement, une boucle ou une aiguille droite est utilisée, elle est imprégnée de l'écouvillon et la gélose est ensemencée par ponction jusqu'à ce qu'elle touche la base de la plaque. Incuber pendant 24 heures à 28 ° C et examiner au microscope au-dessus et en dessous de la plaque pour voir si des chlamydospores se sont formées..
La température et la durée d'incubation varient en fonction du type de microorganisme à isoler. Les plaques sont généralement incubées pendant une à deux semaines dans une plage de température de 20 à 25 ° C..
Cependant, il existe des conditions spécifiques pour certaines souches. Par exemple, la plupart des espèces du genre Aspergillus ont une croissance optimale à 30 ° C; cependant A. fumigatus pousse à 50 ° C.
En ce qui concerne la durée d'incubation, une ou deux semaines est normale, cependant Candida albicans peut se développer en 24 à 48 heures à 25 ° C.
Il se développe en 12 jours d'incubation à 27 ° C. Leurs colonies sont petites (25 mm).
Les colonies ont un aspect velouté, avec une bordure blanche définie et au centre, une teinte bleu-vert qui vire au gris en vieillissant. Le verso de la colonie est orange, plaçant le milieu de la même couleur en raison de la production de pigment.
Se développe avec du mycélium blanc à jaune et des spores noires.
Des colonies beige clair crémeux se développent. Dans la gélose Czapek modifiée forme des chlamydospores.
Un mycélium vert foncé se développe en 7 jours à 25 ° C.
Pour évaluer la qualité du milieu de culture, des souches de contrôle certifiées peuvent être semées, telles que: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger développe un mycélium blanc à jaune et des spores noires en environ 5 jours, tandis que Candida albicans il aura une croissance satisfaisante en 24 heures d'incubation à 25 ° C; les colonies sont de couleur crème.
Certaines études ont révélé que pour la récupération des Actinomycètes, la gélose avec le meilleur rendement est la gélose dextrose de pomme de terre, la gélose Czapek étant la deuxième, mais pour la récupération d'Aspergillus et de Penicillium, la gélose Czapek est celle qui offre le taux de récupération le plus élevé..
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