le Gélose EMB est un milieu de culture solide sélectif et différentiel utilisé pour l'isolement des bacilles Gram négatifs, principalement de la famille des Enterobacteriaceae, et d'autres bacilles Gram négatifs non exigeants. Il est également connu sous l'acronyme EAM, qui signifie éosine-bleu de méthylène..
Ce milieu a été créé par Holt-Harris et Teague en 1916. Il contient de la peptone, du lactose, du saccharose, du phosphate dipotassique, de la gélose, de l'éosine, du bleu de méthylène et de l'eau. Il est très similaire à la gélose MacConkey, en particulier lors de l'utilisation de la gélose EMB modifiée de Levine, qui ne contient pas de saccharose.
En fait, chaque laboratoire décide de travailler avec l'un ou l'autre, car ils remplissent la même fonction, bien que biochimiquement ils soient différents..
Elle présente même le même inconvénient que la gélose MacConkey classique en termes de production grouillante par le genre Proteus. Par conséquent, pour éviter ce phénomène, la concentration en gélose peut être augmentée jusqu'à 5%..
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La gélose EMB est subtilement sélective car elle contient les colorants aniline (éosine et bleu de méthylène), qui agissent comme des inhibiteurs, empêchant la croissance de la plupart des bactéries Gram positives et de certains bâtonnets Gram négatifs exigeants..
Cependant, cette gélose présente l'inconvénient que certaines bactéries Gram positives peuvent résister à la présence de substances inhibitrices et se développer sous forme de petites colonies incolores ponctuelles, telles que Enterococcus faecalis et certaines Staphylocoque.
Certaines levures peuvent également pousser, telles que Complexe de Candida albicans, ce qui donnera de très petites colonies roses. Les chlamydospores peuvent même se développer à partir de cette levure si l'échantillon est profondément ensemencé..
D'autre part, la gélose EMB est également un milieu différentiel, puisque ces colorants ensemble (éosine et bleu de méthylène) ont la propriété de former un précipité à pH acide, ils servent donc d'indicateurs de sa production..
Ainsi, les bactéries fermentant faiblement le lactose ou le saccharose produisent des colonies violettes en 24 à 48 heures. Par exemple les genres Klebsiella, Enterobacter et Serratia.
Les bactéries qui fermentent fortement le lactose, telles que Escherichia coli, ou saccharose, comme Yersinia enterocolitica ou alors Proteus penneri, forment un précipité noir verdâtre, donnant un aspect lustré métallique caractéristique à ces espèces.
Il est à noter que si du milieu EMB levine (sans saccharose) est utilisé, Yersinia enterocolitica Oui Proteus penneri produira des colonies claires.
Les bactéries qui ne fermentent pas le lactose ou le saccharose sont nourries par la présence de peptones, qui fournissent les acides aminés et l'azote nécessaires à la croissance bactérienne, et produisent des colonies claires. Par exemple, les genres Salmonella et Shigella, entre autres.
De même, il est important de noter que le genre Acinetobacter peut présenter des colonies bleu lavande, même s'il ne s'agit pas d'un fermenteur de lactose ou de saccharose, mais a la propriété de fixer le bleu de méthylène sur sa paroi cellulaire. Cela peut également se produire avec d'autres bactéries oxydantes.
Le milieu déshydraté d'origine est de couleur beige clair.
Pour préparer ce milieu de culture, 36 grammes du milieu déshydraté doivent être pesés et mis en suspension dans un ballon contenant un litre d'eau distillée..
Après avoir laissé reposer le mélange pendant 5 minutes, porter le ballon à une source de chaleur, en mélangeant vigoureusement et constamment jusqu'à ce qu'il bout et se dissolve complètement..
Par la suite, le milieu de culture déjà dissous doit être stérilisé à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes..
À la fin du temps, il est retiré de l'autoclave et laissé reposer brièvement. Ensuite, encore tiède (45-50 ° C), 15-20 ml d'agar sont servis dans chaque boîte de Pétri stérile. Le support doit être bleu tournesol.
Après avoir servi, les plaques sont laissées légèrement découvertes jusqu'à ce que la gélose refroidisse légèrement. Ils sont ensuite recouverts et autorisés à se solidifier complètement. Par la suite, ils sont commandés dans des porte-assiettes inversés et conservés au réfrigérateur (8 ° C) jusqu'à leur utilisation..
Cette procédure est de préférence effectuée dans une hotte à flux laminaire ou devant le brûleur Bunsen pour éviter toute contamination..
Il est important de garder à l'esprit que chaque maison commerciale indiquera la quantité à peser pour préparer le milieu de culture..
Le pH final du milieu doit être de 7,2 ± 0,2
Ce milieu est utilisé pour semer l'urine et les selles ou tout type de spécimen clinique, surtout si la présence de bacilles Gram négatifs non exigeants est suspectée, comme les bacilles appartenant à la famille des Enterobacteriaceae, qui poussent très bien sur ce milieu..
Les bactéries entéropathogènes des genres Shigella et Salmonella se distinguent par leurs colonies incolores ou légèrement ambrées.
D'autres bacilles fermentant sans lactose poussent également tels que Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, entre autres..
De même, ce milieu est très utile dans l'analyse microbiologique des aliments et de l'eau, car il est idéal pour la phase de confirmation complète de la détermination des coliformes, c'est-à-dire pour corroborer la présence de E. coli à partir de bouillons EC troubles, de la technique du nombre le plus probable (NPP).
Pour vérifier que le milieu de culture fraîchement préparé fonctionne bien, des souches témoins peuvent être plantées pour observer les caractéristiques des colonies et vérifier qu'elles donnent comme prévu..
Pour cela, des souches ATCC ou des souches bien identifiées de E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa et certaines bactéries Gram positives, telles que S. aureus.
Il est prévu que E. coli Génère des colonies noires bleuâtres bien développées avec des reflets métalliques verts. En tant que, Enterobacter aerogenes Oui Klebsiella sp ils doivent donner des colonies muqueuses bleu-noir bien développées.
Pour sa part, Salmonella typhimurium Oui Shigella flexneri, devrait développer de grandes colonies incolores ou légèrement ambrées.
Enfin le genre Pseudomonas aeruginosa se développe sous forme de colonies incolores de taille irrégulière, tandis que les bactéries Gram positives doivent être totalement inhibées ou se développer de manière clairsemée avec de très petites colonies.
Parfois, la stérilisation entraîne une réduction du bleu de méthylène, montrant une couleur orange moyen. Pour que le bleu de méthylène s'oxyde et récupère la couleur violette, il doit être mélangé doucement jusqu'à ce que la couleur soit récupérée..
De plus, après la stérilisation, le colorant peut précipiter, il doit donc être bien mélangé avant de servir les boîtes de Pétri..
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