le Gélose Hektoen ou la gélose Hektoen entérique est un milieu de culture solide, sélectif et différentiel. Il a été créé à l'Institut Hektoen par King et Metzger pour l'isolement des bactéries entéropathogènes des genres Shigella et Salmonella.
Le milieu est composé de protéose peptone, d'extrait de levure, de sels biliaires, de lactose, de saccharose, de salicine, de thiosulfate de sodium, de chlorure de sodium, de citrate de fer, de citrate d'ammonium, de bleu de bromothymol, de fuchsine acide et d'agar. Cette formulation permet de différencier les genres Shigella et Salmonella du reste des bactéries capables de croître dans ce milieu..
Bien qu'il existe d'autres milieux ayant la même fonction que la gélose Hektoen, il présente un plus grand avantage par rapport aux autres milieux, en particulier lorsque vous souhaitez récupérer des espèces de Shigella..
Les espèces des deux sexes produisent de graves problèmes gastro-intestinaux chez l'homme en raison de la consommation d'aliments contaminés; par conséquent, la transmission est fécale - orale. C'est pourquoi l'utilisation de la gélose Hektoen est principalement indiquée dans l'analyse microbiologique d'échantillons de selles et d'aliments..
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La gélose Hektoen contient des peptones et des extraits de levure comme source de nutriments, fournissant les éléments essentiels pour le développement microbien.
Cependant, il contient également des sels biliaires qui agissent en inhibant la croissance de certaines bactéries, en particulier les Gram positif et certains Gram négatif. C'est pour cette raison qu'il est considéré comme un milieu sélectif.
Par contre, la gélose Hektoen est un milieu différentiel. Cette propriété est conférée par la présence d'hydrates de carbone fermentescibles tels que le lactose, le saccharose et la salicine, ainsi que le système indicateur de pH, représenté par le bleu de bromothymol et la fuchsine acide..
Toutes les bactéries capables de croître sur ce milieu et n'appartenant pas au genre Salmonella et Shigella développeront des colonies de saumon ou d'orange à l'exception du genre Proteus. Ceci est dû à la fermentation d'un ou plusieurs des glucides présents, qui acidifie le milieu, ce qui fait changer l'indicateur de pH..
De son côté, le genre Shigella et Salmonella ne sont capables de fermenter aucun des glucides présents, en utilisant uniquement des peptones comme source d'énergie, ce qui alcalinise le milieu et donc leurs colonies sont bleu-vert.
Des bactéries capables de former du sulfure d'hydrogène (gaz incolore) peuvent également être distinguées dans ce milieu. Le thiosulfate de sodium agit comme source de soufre tandis que le citrate de fer est l'agent de développement. Les deux composés permettent la formation d'un précipité noir de sulfure de fer qui montre la réaction.
Le précipité noir au centre de la colonie entouré d'un halo transparent donne un aspect fish-eye. Cette caractéristique suggère la présence du genre Salmonella.
Enfin, le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique et la gélose donne la consistance solide au milieu..
Peser 76 g du milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Agitez vigoureusement le mélange et laissez-le reposer pendant 10 à 15 minutes. Il peut être chauffé et bouilli, donnant des mouvements rotatifs jusqu'à sa dissolution totale. Ce milieu n'est pas autoclavé.
Lorsque le milieu atteint une température d'environ 45 ° C, verser un volume de 20 ml directement dans des boîtes de Pétri stériles..
On laisse la gélose se solidifier. À ce moment-là, ils sont prêts à être utilisés. Il est recommandé de les utiliser immédiatement. Si cela n'est pas possible, ils sont conservés au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation..
Les assiettes doivent être retirées du réfrigérateur à l'avance avant l'ensemencement pour les amener à température ambiante.
Le pH du milieu doit être de 7,5 ± 0,2. La couleur du milieu déshydraté est violette et le milieu préparé est vert brunâtre.
L'utilisation de la gélose Hektoen est recommandée pour rechercher des bactéries du genre Shigella et Salmonella dans les échantillons de selles et d'aliments..
La possibilité d'isoler ces bactéries est considérablement augmentée si l'échantillon est préalablement enrichi en bouillons spéciaux, tels que bouillon sélénite, bouillon cystine sélénite, bouillon tétrathionate, etc..
L'inoculum doit être solide et le semis se fait par stries. Les plaques sont incubées à 37 ° C pendant 24 à 48 heures en aérobiose.
Une incubation de 48 heures est recommandée car les caractéristiques des colonies sont plus claires pour leur interprétation et leur différenciation à ce moment..
Pour effectuer un contrôle qualité sur ce milieu, des souches bactériennes certifiées sont utilisées, telles que: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 et Shigella sonnei ATCC 25931.
Les résultats attendus sont les suivants: Salmonella typhimurium et Salmonella enteritidis ils doivent développer des colonies bleu-vert avec ou sans centre noir. Alors que l'espèce Shigella se développera sous forme de colonies vert-bleuâtre.
Souches de Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 et Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Dans ces cas, les caractéristiques observées sont les suivantes: E. coli Oui K. pneumoniae les colonies se développeront dans cette couleur saumon moyenne à orange, avec un précipité de la même couleur autour. Alors que Proteus développera des colonies bleu-vert avec ou sans centre noir..
Tandis que S. aureus Oui E. faecalis doit être inhibé, parfois E. faecalis parvient à se développer sous forme de très petites colonies jaunes.
En revanche, comme ce milieu n'est pas autoclavé, il est important d'évaluer la stérilité du milieu. Par conséquent, à partir de chaque lot préparé, une à deux plaques non inoculées doivent être incubées à 37 ° C pendant 24 heures en aérobiose..
Évidemment, aucune croissance d'aucune sorte n'est attendue dans l'assiette.
-Les espèces Proteus peuvent se développer dans ce milieu et les caractéristiques de leurs colonies peuvent être confondues avec les espèces Salmonella ou Shigella. Pour cette raison, toute colonie suspecte doit être confirmée par des tests biochimiques..
-Il est nécessaire d'accompagner l'utilisation de ce milieu avec d'autres géloses moins sélectives, car si le microorganisme recherché se trouve à de faibles concentrations, il risque de ne pas se développer dans ce milieu..
-Ne pas surchauffer pendant la préparation, car une chaleur excessive modifie la composition du milieu.
-Les colonies de Salmonella fermentant le lactose peuvent apparaître inhabituellement et passer inaperçues.
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