Base de gélose pomme de terre dextrose, préparation et utilisation

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Sherman Hoover

le gélose dextrose de pomme de terre C'est un milieu de culture nutritif solide et non sélectif. Des espèces bactériennes et fongiques peuvent s'y développer, mais son utilisation est particulièrement indiquée pour l'isolement des champignons filamenteux et des levures. Il est également connu sous le nom de milieu PDA pour l'expression anglaise Potato Dextrose Agar.

Il est particulièrement utile pour l'isolement des champignons phytopathogènes, c'est-à-dire ceux qui affectent les plantes. Pour semer les échantillons de légumes infectés, d'autres moyens tels que la gélose Sabouraud ou l'agar malta peuvent être utilisés, cependant, pour une utilisation de routine, l'agar dextrose de pomme de terre est préféré en raison de l'obtention d'une plus grande sporulation..

Aspergillus niger et Sinemas sur gélose dextrose de pomme de terre respectivement. Source: Alextrevelian 006 sur Wikipedia anglais [domaine public] / Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Il est également utilisé pour le comptage des colonies fongiques dans des échantillons de cosmétiques, de produits pharmaceutiques et de certains produits laitiers. De même, il convient pour semer des échantillons de raclures de peau à la recherche de dermatophytes, qui poussent très bien dans ce milieu, développant leurs pigments caractéristiques..

Le milieu de dextrose de pomme de terre est un milieu très simple et facile à préparer en laboratoire. Contient, comme son nom l'indique, une infusion de pomme de terre, de dextrose et d'agar-agar. De plus, des substances inhibitrices peuvent être ajoutées pour empêcher la croissance bactérienne et augmenter la sélectivité pour les espèces fongiques..

Index des articles

  • 1 Justification
  • 2 Préparation
    • 2.1 -Préparation maison (non commerciale) de gélose dextrose de pomme de terre
    • 2.2 -Préparation commerciale de gélose dextrose de pomme de terre
  • 3 utilisations
    • 3.1 Processus de semis d'échantillons de plantes sur gélose dextrose de pomme de terre
    • 3.2 Procédé d'ensemencement d'échantillons de peau, de cheveux ou d'écailles d'ongle sur de la gélose dextrose de pomme de terre
    • 3.3 Procédure d'identification
    • 3.4 Comptage des colonies
    • 3.5 Maintenance des souches fongiques
  • 4 Contrôle qualité
  • 5 Références

Base

La gélose pomme de terre au dextrose est un milieu de culture qui fournit les éléments nutritionnels nécessaires au développement des champignons filamenteux et des levures..

La combinaison de l'infusion de pomme de terre avec du glucose fournit la source d'énergie parfaite pour une croissance satisfaisante des champignons. Alors que la gélose est celle qui donne la consistance au milieu.

Le milieu en lui-même n'inhibe pas la croissance des bactéries, il s'agit donc d'un milieu non sélectif. Pour le rendre sélectif, il a besoin de l'ajout de substances inhibitrices telles que l'acide tartrique ou des antibiotiques..

préparation

-Préparation maison (non commerciale) de gélose dextrose de pomme de terre

des boîtes de Pétri

Il est préparé comme suit:

En premier lieu, les pommes de terre sont très bien lavées, enlevant la terre qu'elles possèdent. Ils sont coupés en fines tranches avec tout et coque. 200 g de pommes de terre sont pesés et bouillis dans un litre d'eau distillée pendant une demi-heure.

À la fin du temps, filtrer ou filtrer toute la préparation à travers une étamine.

Le liquide obtenu est complété par de l'eau distillée jusqu'à un litre. Ajouter 20 g d'agar-agar et 20 g de dextrose à l'infusion, bien mélanger et autoclave à 121 ° C, à 15 livres de pression pendant 15 minutes..

Laisser refroidir à 50 ° C et servir dans des boîtes de Pétri stériles. Les assiettes préparées sont conservées au réfrigérateur..

Cales

Des quartiers de gélose au dextrose de pomme de terre peuvent également être préparés..

Dans ce cas, avant de stériliser à l'autoclave, 12 à 15 ml de milieu sont placés dans des tubes, plus tard ils sont autoclavés et en partant ils reposent sur des supports spéciaux jusqu'à ce qu'il se solidifie. Conserver au frigo.

Le milieu reste à un pH de 5,6 ± 0,2, cependant, certains laboratoires ajoutent 10% d'acide tartrique pour abaisser le pH à 3,1 ± 0,1 afin d'inhiber la croissance bactérienne..

Dans ce même sens, d'autres laboratoires préfèrent ajouter des antibiotiques pour le rendre sélectif pour la culture de champignons et empêcher le développement bactérien..

-Préparation commerciale d'agar dextrose de pomme de terre

Peser 39 g du milieu déshydraté disponible dans le commerce et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Laisser reposer 5 minutes.

Le mélange est chauffé sous agitation fréquente jusqu'à dissolution complète. Ensuite, il est stérilisé dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes..

Des assiettes ou des coins peuvent être préparés. Procédez comme décrit ci-dessus.

Le pH est de 5,6 ± 0,2. Si le pH de 3,1 est souhaité, il faut ajouter 14 ml d'acide tartrique stérile à 20% avant de servir sur les assiettes..

Le milieu brut est beige et le milieu préparé est ambre clair avec un aspect légèrement trouble ou opalescent..

Applications

Procédé de semis d'échantillons de plantes sur gélose dextrose de pomme de terre

-Pour les feuilles tachetées

Les feuilles sont coupées en morceaux.

Dans un verre de 50 cc avec 50% d'alcool, placez les morceaux de feuilles (morceaux tachés et sains), pour désinfecter la surface pendant 20 à 30 secondes. Jetez l'alcool et ajoutez 20% d'hypochlorite de sodium pendant 40 à 50 secondes s'il s'agit de feuilles minces et augmentez le temps à 80 secondes s'il s'agit d'écorce et de bûches.

Jeter l'hypochlorite de sodium et prendre les pièces désinfectées avec une pince stérile et les placer sur la surface du milieu (un maximum de 10 pièces). Dater et incuber à 20-30 ° C.

-Pour les fruits et tubercules

Si le fruit est charnu, ouvrez le fruit affecté par le champignon et prélevez des morceaux avec un scalpel stérile, à la fois des parties malades et saines et placez-les sur la surface de la gélose.

Si le fruit est un agrume, comme un citron ou une orange, il doit être ouvert et ses graines semées.

Lorsque la surface du fruit est affectée et que des spores sont observées, l'idéal est d'utiliser la méthode de râpage sur l'assiette; Cela consiste à toucher les spores avec une spatule en forme de «L» stérilisée et refroidie, puis à faire un ensemencement en zigzag 2 à 3 fois sur la gélose.

-Pour les céréales

Ils sont désinfectés comme décrit dans les feuilles et plus tard placés sur la gélose.

-Pour les branches et les tiges

Un grattage de l'écorce est effectué et des morceaux ultérieurs de la partie saine et malade sont prélevés et semés directement sur la gélose.

Les plaques ensemencées sont incubées en aérobiose à 20-30 ° C pendant 72 heures.

Procédé d'ensemencement d'échantillons de peau, de cheveux ou d'écailles d'ongle sur de la gélose dextrose de pomme de terre

L'échantillonnage doit être effectué à l'aide d'une lame de scalpel n ° 11, soit pour couper les cheveux touchés, les écailles de la peau ou les ongles à la recherche de dermatophytes. Avant de prélever l'échantillon, la zone doit être désinfectée avec de l'alcool à 70%..

-Échantillon de peau

Dans les lésions squameuses, le bord de la lésion doit être gratté, car le champignon est plus susceptible de s'y trouver.

Dans les lésions exsudatives, l'échantillon est prélevé avec un écouvillon sec ou humide. Semer immédiatement sur gélose pomme de terre dextrose ou gélose Sabouraud. Évitez les moyens de transport.

Une autre méthode d'échantillonnage est la technique du carré de tapis de Mariat et Adan Campos. Dans ce cas, la zone touchée est frottée 5 fois avec un morceau de laine stérile pour une culture ultérieure..

L'échantillon peut être placé directement dans le milieu de culture.

-Échantillon de cheveux

Selon la pathologie, la partie affectée peut être coupée ou déracinée. Placer l'échantillon dans le milieu de culture.

-Échantillon d'ongle

Une partie spécifique de l'ongle affecté peut être grattée ou coupée. Cela dépendra du type de blessure.

Couper l'échantillon en morceaux de 1 mm avant le semis afin d'augmenter la probabilité de contact du champignon avec le milieu de culture..

Procédure d'identification

Les colonies obtenues dans la plaque sont isolées dans des tubes contenant de la gélose pomme de terre dextrose pour réaliser l'étude macroscopique des colonies (aspect, couleur, consistance, degré de développement.

L'étude microscopique (observation des structures et de leurs formations) peut se faire par microcultures ou observation directe au microscope entre lamina et lamella..

Nombre de colonies

Ce milieu peut également être utilisé pour déterminer la charge fongique et levurienne présente dans des échantillons végétaux, alimentaires, cosmétiques ou médicamenteux. À cette fin, on utilise de la gélose au dextrose de pomme de terre complétée par des antibiotiques, tels que: (chloramphénicol, chlorotétracycline ou les deux).

Verser 1 ml de l'échantillon - dilué de préférence - dans une boîte de Pétri stérile et vide, puis faire fondre un bouchon de gélose pomme de terre au dextrose et laisser refroidir à 45 ° C. Verser sur la boîte de Pétri et faire tourner jusqu'à homogénéisation. Laisser reposer jusqu'à ce qu'il soit solide.

Incuber en aérobie à 20-25 ° C (moisissures) ou 30-32 ° C (levures) pendant 5 à 7 jours ou plus, selon le type de champignon recherché et le type d'échantillon. Deux plaques peuvent être utilisées pour incuber dans les deux plages de température.

Comptage des colonies fongiques dans un échantillon alimentaire. Gélose au dextrose de pomme de terre complétée d'antibiotiques. Source: photo Pxhere.com / 777267

Entretien des souches fongiques

La gélose au dextrose de pomme de terre peut être utilisée pour maintenir des souches fongiques viables pendant plusieurs années.

Pour ce faire, le champignon est cultivé dans des quartiers de gélose dextrose de pomme de terre et une fois que le champignon a poussé, il est recouvert d'huile minérale. L'huile doit être stérilisée dans un autoclave pendant 45 minutes et avoir une viscosité d'environ 300 à 330 Saybolt. L'huile doit être de 1 à 2 cm au-dessus de la pointe du biseau.

Contrôle de qualité

De chaque lot préparé, 1 ou 2 plaques doivent être prélevées et incubées à 25 ° C pendant 48 heures ou à 20 ° C pendant 96 heures. Un bon contrôle de stérilité est celui dans lequel le développement des colonies n'est pas observé..

Souches de contrôle connues ou certifiées telles que:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Une bonne croissance est attendue dans tous les cas.

Les références

  1. Laboratoires Britannia. Pomme de terre gélose au glucose. 2015. Disponible sur: britanialab.com
  2. Laboratoires Neogen. Gélose à la pomme de terre et au dextrose. Disponible sur: foodsafety.neogen.com
  3. Laboratoire Insumolab. Gélose à la pomme de terre et au dextrose. Disponible sur: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologique Bailey & Scott. 12 éd. Éditorial Panamericana S.A. Argentine.
  5. Casas-Rincón G. Mycologie générale. 1994. 2e éd. Université centrale du Venezuela, éditions de la bibliothèque. Venezuela Caracas.
  6. Aceituno M. Évaluation de la qualité microbiologique des fards à paupières, type de poudre compacte d'un laboratoire national de production, selon la méthode de référence Pharmacopea Usp 2005. Thèse pour se qualifier pour le titre de chimiste pharmaceutique. Université de San Carlos du Guatemala.
  7. Cuétara M. Traitement des échantillons de surface. Journal ibéro-américain de mycologie. 2007; pp. 1-12

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