le eau peptonée Il s'agit d'un milieu d'enrichissement liquide non sélectif, utilisé principalement comme diluant pour des échantillons d'aliments ou d'autres matériaux. Ce milieu d'un point de vue chimique est très simple, il contient de la peptone de viande, du chlorure de sodium et de l'eau..
Il a une certaine valeur nutritionnelle, permettant d'enrichir l'échantillon. S'il y a des bactéries abusées, ce milieu a le pouvoir de réparer la viabilité. Il est particulièrement utile dans la récupération de bactéries appartenant à la famille des entérobactéries..
Dans le cas de la récupération des salmonelles, l'utilisation de la variante de l'eau peptonée tamponnée est recommandée; Celui-ci sert de milieu de pré-enrichissement pour l'échantillon, dans ce cas il contient d'autres éléments tels que le phosphate disodique et le phosphate dipotassique..
Normalement, l'eau peptonée est préparée à un pH neutre, mais il existe d'autres variantes où il est nécessaire que le pH soit de 8,5 ± 0,2 (alcalin), car la bactérie à isoler est alcaline, telle que Vibrio cholerae.
De plus, ce milieu peut être utilisé comme milieu de base pour les tests de fermentation des glucides..
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Les peptones fournissent les nutriments nécessaires à la croissance bactérienne, en particulier l'azote et les acides aminés à chaîne courte, tandis que le chlorure de sodium maintient l'équilibre osmotique..
De plus, le milieu permet de disperser, d'homogénéiser et de réparer les cellules bactériennes qui ont été endommagées par des procédés industriels..
En tant que diluant, il est idéal, remplaçant efficacement la solution physiologique (SSF) ou la solution tampon phosphate (PBS).
La croissance bactérienne est évidente en observant sa turbidité..
Peser 1 g de peptone et 8,5 g de chlorure de sodium, dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Le pH doit être ajusté à 7,0. Pour cela, du chlorure de sodium 1 N peut être utilisé..
Peser 15 g du milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Homogénéiser le mélange. Si nécessaire, le mélange est bouilli pendant 1 minute pour aider à la dissolution totale. Servir dans des flacons de 100 ml ou des tubes de 10 ml selon les besoins. Autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
Laisser refroidir et utiliser ou conserver au réfrigérateur. Le pH final du milieu est de 7,2 ± 0,2.
La couleur du milieu déshydraté est beige clair et le milieu préparé est ambre clair.
A la préparation précédente - avant la stérilisation - le glucide doit être ajouté à une concentration finale de 1%, plus l'indicateur Andrade (acide fuchsine) ou le rouge de phénol (0,018 g / L). Les tubes doivent être équipés d'une cloche Durham pour observer la formation de gaz.
Il contient de l'hydrolysat enzymatique de caséine, du chlorure de sodium, du dihydrogénophosphate de potassium et de l'hydrogénophosphate de sodium dodécahydraté. Le pH final est de 7,0 ± 0,2.
Pour sa préparation, peser 20 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau distillée. Laissez reposer environ 5 minutes. Chauffer 1 minute jusqu'à dissolution complète.
Verser dans des bocaux appropriés au besoin. Stériliser à l'autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
Peser 25 g de milieu déshydraté et dissoudre dans 1 litre d'eau. Procédez comme décrit ci-dessus. Le pH varie de 8,3 à 8,7.
L'inoculum se fait en plaçant l'échantillon directement.
Il est utilisé pour diluer des échantillons, en particulier lorsque l'on soupçonne que des bactéries peuvent être endommagées. Habituellement, les dilutions sont de 1:10 et 1: 100.
Incuber pendant 24 heures en aérobiose à 35-37 ° C.
Pour les échantillons de selles à la recherche de Salmonella, l'utilisation d'eau tamponnée ou tamponnée est recommandée comme milieu de pré-enrichissement..
Pour ce faire, procédez comme suit:
Si les selles se forment, prélevez 1 g d'échantillon. S'ils sont liquides, prélever 1 ml de selles et les suspendre dans un tube avec 10 ml d'eau peptonée tamponnée. Pour les écouvillons rectaux, déchargez le matériau de l'écouvillon dans le tube avec de l'eau peptonée tamponnée.
Dans tous les cas, mélangez et homogénéisez très bien l'échantillon..
Incuber à 37 ° C pendant 18 à 24 heures. Subculture ensuite dans un bouillon d'enrichissement tel que le bouillon sélénite cystine ou le bouillon tétrathionate à 37 ° C pendant 18 à 24 heures de plus. Enfin, cultivez dans des milieux sélectifs pour Salmonella, tels que la gélose SS, la gélose XLD, la gélose Hektoen, entre autres..
L'eau peptonée est utilisée comme milieu d'enrichissement ou comme simple diluant, mais si des espèces de Salmonella sont recherchées, elle est utilisée comme milieu de pré-enrichissement, comme déjà décrit..
Dans les aliments, procédez comme suit:
Pour les aliments solides, peser 25 g de l'échantillon et pour les aliments liquides, en mesurer 25 ml. Placer ladite portion dans des flacons contenant 225 ml d'eau peptonée. Mélanger et homogénéiser l'échantillon.
Si la charge microbienne est suspectée d'être élevée, des dilutions en série ou décimales peuvent être effectuées pour faciliter le comptage des unités formant colonie (UFC)..
Le nombre de dilutions dépendra du type d'échantillon et de l'expérience de l'analyste..
Si, au contraire, on soupçonne que la charge microbienne est très faible, il n'est pas nécessaire de procéder à des dilutions. Par la suite, sous-culture sur des milieux sélectifs.
Dans le cas des aliments de la mer, tels que les crustacés, les poissons, entre autres, à la recherche de Vibrio cholerae ou d'autres espèces de Vibrio, de l'eau peptonée ajustée à pH 8,5 (eau peptonée alcaline) doit être utilisée.
A partir de chaque lot préparé, un à deux tubes doivent être incubés sans ensemencement pendant 24 heures en aérobiose à 37 ° C. À la fin du temps, aucune turbidité ou changement de couleur ne doit être observé.
Des souches témoins connues peuvent également être utilisées pour évaluer leur efficacité:
Les souches bactériennes suivantes peuvent être utilisées à cet effet: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.
Dans tous les cas, un développement microbien satisfaisant est attendu, ce qui est observé par la turbidité du milieu..
-Le milieu déshydraté est très hygroscopique, il doit donc être tenu à l'écart de l'humidité.
-Le milieu ne doit pas être utilisé si un type de détérioration est observé.
-Le milieu de culture déshydraté doit être conservé entre 10 et 35 ° C
-Le milieu préparé doit être conservé au réfrigérateur (2-8 ° C).
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