Caractéristiques, utilisation, techniques, toxicité de la safranine

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Anthony Golden

La safranine C'est un colorant mériquinoïde, nommé pour avoir dans sa structure chimique 2 anneaux benzénoïdes et 2 anneaux quinoïdes, ces derniers étant ceux qui fournissent la couleur rouge.

Il est également appelé diméthyl safranine ou rouge basique 2 dans sa forme courte, car son nom scientifique est 3,7-diamino-2,8-diméthyl-5-phényl-phénaziniumchloro diméthyl safranine et la formule chimique est CvingtH19N4 Cl.

Structure chimique de la safranine indiquant les anneaux benzénoïdes et quinoïdes / Solution aqueuse de safranine. Source: NEUROtiker [domaine public] édité par MSc. Marielsa Gil / LHcheM [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

Il existe une variante appelée triméthyl-safranine mais il n'y a pas de différence significative entre les deux substances.

La safranine est un colorant monochromatique et, selon les caractéristiques de la formule chimique, c'est une substance chargée positivement. Par conséquent, il a une affinité pour les structures chargées négativement. Ces structures seront colorées en rouge.

Cette propriété lui confère une applicabilité dans de nombreuses techniques histologiques pour colorer diverses structures cellulaires, à la fois dans les organismes eucaryotes et procaryotes..

La safranine est utilisée comme colorant de contraste dans des techniques importantes et bien connues pour une utilisation de routine en bactériologie. Ces techniques sont: la coloration Gram-Hucker, la coloration Schaeffer Fulton pour les spores ou la coloration des capsules bactériennes, entre autres..

Index des articles

  • 1 Fonctionnalités
  • 2 Utilisation
  • 3 Techniques dans le domaine de la bactériologie
    • 3.1 Coloration de Castañeda pour la coloration des rickettsies
    • 3.2 Coloration Koster modifiée pour Brucella
    • 3.3 Coloration des capsules bactériennes
    • 3.4 Coloration des spores de Schaeffer Fulton
    • 3,5 coloration Gram-Hucker
  • 4 Techniques dans le domaine de l'histologie
    • 4.1 Coloration des cellules de Kulchitsky (entérochromaffines)
    • 4.2 Coloration pour la détection de l'arthrose
    • 4.3 Coloration pour l'identification des macroalgues
  • 5 Toxicité
  • 6 Références

Caractéristiques

La couleur du safran (une épice obtenue à partir des stigmates de la fleur de Crocus sativus) a été l'inspiration pour nommer cette coloration. Du terme safran vient le nom de safranine. Cela est dû à la grande similitude entre la couleur du safran et la coloration fournie par ce colorant..

La safranine est obtenue sous forme de cristaux ou de poudre, les deux présentations étant solubles dans l'eau. Le colorant safranine est inodore. Tache les structures en rouge. Les structures qui attirent le colorant safranine sont appelées safranophiles..

Structurellement, la safranine est complexe, elle possède deux anneaux benzénoïdes aux extrémités et au centre se trouvent les deux anneaux quinoïdes où se trouve le cation N.+. Le centre de la structure est le système chargé de fournir la couleur. En raison de cette caractéristique, ce colorant est classé dans la catégorie II..

Utiliser

La safranine est utilisée pour colorer diverses structures. Met particulièrement en évidence les cellules de Kulchitsky présentes dans le tractus gastro-intestinal, également appelées cellules d'entérochromaffine.

Il est capable de colorer les micro-organismes appartenant à la famille Rickettsiaceae. De même, il est utilisé dans diverses techniques, comme la méthode Koster, une méthode modifiée utilisée pour la coloration des bactéries du genre Brucella.

D'autre part, la safranine est utilisée dans la technique de coloration des spores de Schaeffer Fulton et dans la coloration de Gram-Hucker. Dans les deux techniques, la safranine fonctionne comme un colorant de contraste.

Dans la première, les spores prennent la couleur du vert malachite et le reste des structures est rouge par la safranine. Dans la seconde, les bactéries Gram négatives perdent la couleur du cristal violet lors de l'étape de décoloration, donc la safranine est celle qui colore les bactéries Gram négatives en rouge..

De plus, la safranine est utilisée en bactériologie pour préparer des milieux d'agar Brucella avec une dilution de 1: 5000 de safranine. Ce milieu sert à différencier les espèces Brucella suis du reste de l'espèce. Brucella melitensis Oui Brucella abortus ils grandissent dans cet environnement mais B. suis est inhibé.

Dans le domaine agro-industriel, la safranine a été utilisée à 2,25% et diluée à 1:10 pour colorer les échantillons de tige de l'usine de canne à sucre.

Cette plante est généralement affectée par les bactéries Leifsonia xyli subsp. xyli, qui endommage le xylème de la plante. Les tiges colorées sont évaluées pour déterminer la fonction des vaisseaux du xylème..

Techniques dans le domaine de la bactériologie

Teinture Castañeda pour teinture rickettsies

Un frottis sanguin ou tissulaire est placé dans une solution tampon (tampon phosphate pH 7,6). Il est laissé sécher spontanément, puis recouvert de bleu de méthylène pendant 3 minutes et contre-coloré à la safranine. Les rickettsies sont de couleur bleue, contrastant avec le fond rouge.

Coloration Koster modifiée pour Brucella

Un frottis est fait et flambé dans le briquet pour la fixation. Ensuite, il est recouvert d'un mélange de 2 parties de safranine aqueuse saturée de 3 parties d'une solution 1 mol / L de KOH, pendant 1 minute. Il est lavé avec de l'eau distillée et contre-coloré avec 1% de bleu de méthylène carbolique..

Si l'échantillon contient des bactéries du genre Brucella ceux-ci apparaîtront en orange sur fond bleu.

Coloration de la capsule bactérienne

Un mélange de suspension bactérienne est fait avec de l'encre de Chine et de la safranine y est ajoutée. Au microscope, un halo rougeâtre sera observé autour de chaque capsule bactérienne avec un fond noir..

Coloration des spores Schaeffer Fulton

Un frottis est réalisé avec la suspension bactérienne. Ensuite, il est fixé à chauffer. Il est recouvert de 5% de vert malachite, souvent enflammé jusqu'à ce que des vapeurs soient émises. Le processus est répété pendant 6 à 10 minutes. Enfin, il est lavé à l'eau et contre-coloré avec 0,5% de safranine pendant 30 secondes. Bacilli tache rouge et spores vert.

Coloration de Gram-Hucker

Un frottis est fait avec une suspension bactérienne et il est fixé à la chaleur. Couvrir la lame de cristal violet pendant 1 minute. Ensuite, le lugol est placé sous forme de solution mordante pendant 1 minute. Ensuite, il est blanchi avec de l'alcool acétonique et enfin contre-coloré avec de la safranine pendant 30 secondes..

Les bactéries Gram positives se colorent en violet bleuâtre et les bactéries Gram négatives en rouge.

Certains laboratoires ont arrêté d'utiliser la technique de Gram-Hucker pour adopter la technique de Gram-Kopeloff modifiée. Dans ce dernier, la safranine est remplacée par la fuchsine basique. C'est parce que la safranine tache faiblement les espèces des genres Legionella, Campylobacter Oui Brucella.

Techniques dans le domaine de l'histologie

Coloration des cellules de Kulchitsky (entérochromaffines)

Les coupes de tissu du tractus gastro-intestinal sont colorées avec du chlorure d'argent. Il est ensuite décoloré avec du thiosulfate de sodium et enfin contre-coloré avec de la safranine.

Les cellules de Kulchitsky se distinguent par la présence de granules brun noirâtre..

Tache d'arthrose

Parce que la safranine a une charge positive, elle se lie très bien aux groupes carboxyle et sulfate des glycosaminoglycanes. Ceux-ci font partie des protéoglycanes qui composent le cartilage articulaire. En ce sens, lors de la coloration avec la safranine O, il est possible d'identifier s'il y a ou non perte de cartilage..

La perte de tissu cartilagineux peut être mesurée à l'aide de l'échelle de Mankin ou également appelée échelle d'arthrose..

La technique est expliquée ci-dessous: la coupe histologique est immergée dans un bac avec la solution d'hématoxyline ferrique de Weigert, puis passée dans de l'alcool acide et lavée à l'eau.

Continuez le processus de coloration en immergeant la lame en vert rapide, elle est lavée avec de l'acide acétique et maintenant elle est immergée dans la safranine O. Pour terminer le processus, elle est déshydratée à l'aide d'alcools à différentes concentrations dans l'ordre croissant. La dernière étape nécessite du xylène ou du xylol pour que l'échantillon se clarifie.

Les lames sont conditionnées avec du baume du Canada ou similaire pour être observées au microscope.. 

Avec cette technique, les noyaux sont colorés en noir, l'os en vert et le cartilage où se trouvent les protéoglycanes en rouge.

Colorant pour l'identification des macroalgues

Pérez et al ont proposé en 2003 une technique simple et peu coûteuse pour teindre les macroalgues. Les échantillons sont préparés en coupes histologiques à la paraffine. Les coupes sont fixées avec 1% de glycérine, ce qui leur permet de sécher complètement. Il est ensuite placé dans du xylol pour éliminer la paraffine.

La coupe est réhydratée en la passant à travers une série de plateaux contenant de l'éthanol à différents degrés de concentration (ordre décroissant), pendant 2 min dans chacun..

Ensuite, il est coloré pendant 5 minutes avec un mélange 3: 1 de safranine à 1% avec 1% de bleu de toluidine, tous deux préparés avec de l'éthanol à 50%. Trois gouttes d'acide picrique sont ajoutées au mélange, qui agit comme un mordant..

Ensuite, il est déshydraté en repassant dans les bacs à alcool, mais cette fois de manière ascendante. Enfin, il est rincé au xylol et l'échantillon est préparé avec du baume du Canada pour être observé..

Toxicité

Heureusement, la safranine est un colorant qui ne présente aucun danger pour ceux qui la manipulent. C'est un colorant inoffensif, il n'est pas cancérigène et il n'est pas inflammable..

Le contact direct avec la peau ou les muqueuses peut provoquer une légère rougeur de la zone, sans complications majeures. Pour cela, il est recommandé de laver la zone touchée avec beaucoup d'eau.

Les références

  1. Colorant García H.Safranin O. Technicien de la santé, 2012; 1 (2): 83-85. Disponible sur: medigraphic.com
  2. Coloration Gil M. Gram: fond de teint, matériaux, technique et utilisations. 2019. Disponible sur: lifeder.com
  3. Coloration de Gil M. Spore: justification, techniques et utilisations. 2019. Disponible sur: lifeder.com
  4. Safranina. " Wikipedia, l'encyclopédie libre. 7 mars 2017, 10:39 UTC. 3 août 2019, 20:49 en.wikipedia.org
  5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Technique de coloration utile dans l'interprétation anatomique de Gracilariopsis tenuifrons Oui Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Minutes Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponible sur: scielo.org.
  6. Iglesia Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relation entre la fonctionnalité des vaisseaux du xylème et la présence de Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Veg Protection. 2007; 22 (1): 65-65. Disponible sur: scielo.sld

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