La Coloration de mai Grünwald-Giemsa o Pappenheim est une technique de coloration différentielle qui mélange les réactifs Giemsa et May Grünwald. Il est utilisé pour la différenciation des cellules sanguines normales et anormales dans les frottis de sang périphérique et de moelle osseuse, ainsi que pour la coloration des coupes histologiques et des échantillons cytologiques..
Les deux réactifs -Giemsa et May Grünwald- sont dérivés d'une coloration de type Romanowsky, une technique basée sur la combinaison de colorants acides et basiques..
Giemsa a amélioré la technique en stabilisant le mélange d'éosine, de bleu de méthylène et de leurs dérivés, avec du glycérol. Au lieu de cela, May Grünwald utilise de l'éosine et du bleu de méthylène, en utilisant du méthanol comme solvant. Cette combinaison stratégique a donné d'excellents résultats.
Si en termes d'observation de la morphologie cellulaire elle agit de manière similaire aux colorations de Giemsa et Wright, cette technique améliore les précédentes en affinant la coloration des parasites responsables du paludisme, de la maladie de Chagas, de la leishmaniose et de la trichomonase..
De plus, il s'est avéré être une technique très utile pour l'étude cytologique du liquide spermatique. Il s'est démarqué non seulement en montrant les caractéristiques morphologiques des spermatozoïdes, mais aussi en permettant la différenciation des leucocytes, des cellules épithéliales et des cellules de spermatogenèse avec une grande efficacité..
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La technique suit la base des colorants Romanowsky, dans lesquels les colorants acides ont une affinité sélective pour les composants cellulaires basiques et les composants acides attirent les colorants basiques..
Expliqué d'une autre manière, les structures cellulaires et les colorants ont des charges électriques positives ou négatives; comme les charges repoussent et différentes charges attirent.
Par exemple, les colorants basiques comme le bleu de méthylène sont chargés positivement et attirés par des structures chargées négativement. C'est pourquoi ce colorant colore les noyaux riches en ADN et en ARN qui ont des groupes phosphate chargés négativement..
Les granules de basophiles segmentés et les cytoplasmes de globules blancs mononucléaires contenant de l'ARN sont également colorés..
De même, le colorant acide porte une charge négative, c'est pourquoi il se lie à des structures chargées positivement telles que les érythrocytes et les granules d'éosinophiles segmentés. Quant aux granules des neutrophiles segmentés, ils fixent les deux colorants.
Dans cette technique, une combinaison de réactions coexiste entre les colorants orthochromatiques et métachromatiques. Les orthochromatiques (éosine et bleu de méthylène) se lient à la structure cellulaire à laquelle ils sont liés et fournissent une couleur stable qui ne varie pas.
D'autre part, les métachromatiques (les dérivés du bleu de méthylène azur A et azur B), varient leur couleur d'origine une fois attachés à la structure spécifique, et il peut même y avoir une variété de nuances.
Enfin, l'étape que prend la solution de May Grünwald nécessite la présence d'eau, car sans cela le colorant pénétrera dans les structures mais ne durcira pas. Pour que cela se produise, le colorant doit devenir polaire ou s'ioniser, et ainsi pouvoir précipiter et se lier à des structures apparentées..
- Lames de microscope.
- Ponts de coloriage.
- Solution de May-Grünwald.
- Tache de Giemsa.
- Eau distillée.
0,25 g d'éosine-bleu de méthylène (colorant selon May Grünwald) doivent être pesés et dissous dans 100 ml de méthanol. Ensuite, la préparation est mélangée pendant 1 heure et laissée au repos pendant 24 heures. Quand le temps est écoulé, ça fuit.
Pour appliquer la technique, le colorant May Grünwald doit être dilué comme suit: pour 200 ml de colorant dilué, mesurer 30 ml de solution concentrée, ajouter 20 ml de solution tampon et 150 ml d'eau distillée ajustée à pH 7,2-7,3. Plus tard, il est mélangé et filtré.
0,5 g d'azur-éosine-bleu de méthylène (colorant selon Giemsa) doit être pesé, dissous dans 50 ml de méthanol et 50 ml de glycérine ajoutés au mélange.
Pour effectuer la technique, il est dilué à 1:10 avec une solution tampon et laissé au repos pendant 10 minutes. Peut être filtré si nécessaire.
Ils doivent être pesés:
- 40 mg de dihydrogénophosphate de potassium (KH2PO4).
- 151 mg d'hydrogénophosphate de sodium di-sodique 12-hydraté (Na2HPO4).
Les deux composés sont dissous dans 100 ml d'eau.
Il existe deux modes: un classique et un rapide.
Les techniques décrites ici sont à titre indicatif, mais il faut tenir compte du fait que les procédures et les temps de coloration varient en fonction de la société commerciale qui distribue les réactifs. Il est conseillé de suivre les étapes strictement indiquées par chaque maison commerciale.
1- Couvrir le frottis d'une fine couche de la solution de May Grünwald pendant 4 minutes.
2- Retirer le colorant et laver à l'eau distillée.
3- Placer une couche de Giemsa diluée (1:10) dans de l'eau distillée pendant 15 minutes.
4- Retirer le colorant et laver à l'eau distillée.
5- Laisser sécher et observer au microscope.
La technique nécessite que les réactifs et les solutions de lavage aient un pH ajusté à 7,2 -7,3, de sorte que les affinités des colorants pour les structures cellulaires ne soient pas déformées et que la couleur finale attendue ne varie pas..
Cette technique est utilisée par les laboratoires cliniques pour colorer les frottis de sang périphérique et de moelle osseuse, les coupes de tissus et les cytologies..
Dans le domaine hématologique, cette technique est d'une importance vitale dans l'étude des anomalies des cellules en termes de forme, taille et nombre. C'est un outil très précieux pour le diagnostic de certaines maladies, telles que les leucémies et les anémies.
De plus, il est d'une utilité exceptionnelle lors de la recherche de parasites dans les zones hématologiques (Plasmodium sp Oui Trypanosome cruzi) ou histologique (Leishmanias sp).
Concernant la cytologie vaginale, cette technique est particulièrement avantageuse pour l'observation de Trichomonas vaginalis. C'est une découverte importante, car sa présence simule des images de carcinome. in situ qui disparaissent ensuite lorsque le parasite est éliminé.
C'est un outil idéal pour l'étude d'échantillons de spermatozoïdes, car il fournit des informations précieuses sur la qualité du sperme.
Les données qu'elle propose concernent principalement le nombre et la morphologie, ainsi que les cellules concomitantes qui peuvent être présentes et qui sont d'une importance vitale, telles que les cellules germinales, les leucocytes et les cellules épithéliales..
Avec cette analyse, il est possible de décrire les anomalies observées dans le sperme dans la tête, le cou, la pièce médiane et la partie principale..
En outre, ils peuvent également aider à mettre en évidence des cas d'hémospermie (présence de globules rouges dans le sperme) et de leucospermie ou piospermie (augmentation du nombre de leucocytes dans le sperme).
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