le gélose M.R.S. est un milieu de culture solide sélectif, utilisé pour l'isolement et le comptage des bactéries lactiques, notamment du genre Lactobacillus. Cette gélose a été créée en 1960 par Man, Rogosa et Sharpe, portant le même nom, mais en raison de sa complexité, l'abréviation M.R.S est souvent utilisée..
Il est composé de protéose peptone, d'extrait de viande, d'extrait de levure, de glucose, de monoléate de sorbitane, de phosphate dipotassique, d'acétate de sodium, de citrate d'ammonium, de sulfate de magnésium, de sulfate de manganèse et d'agar..
Cette composition permet le bon développement des bactéries lactiques à partir d'échantillons cliniques, tels que les matières fécales, les pertes vaginales, les échantillons oraux et le lait maternel, ainsi que les produits laitiers et carnés.
Il n'est pas utilisé systématiquement dans les laboratoires cliniques, car les bactéries lactiques sont rarement impliquées dans les processus pathologiques. Cependant, dans le domaine de la microbiologie alimentaire, l'utilisation de la gélose M.R.S est plus fréquente..
En revanche, ce milieu est utilisé par certains centres de recherche dont l'objectif est l'étude des bactéries lactiques..
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La gélose Man, Rogosa et Sharpe a une composition assez complexe. En décomposant la fonction de chacun de ses composants, sa base peut être expliquée.
La protéine peptone, l'extrait de viande, l'extrait de levure et le glucose sont des nutriments qui fournissent la source de carbone, d'azote, de vitamines et de minéraux nécessaires à la croissance bactérienne. De plus, le glucose est la source d'énergie universelle utilisée dans la plupart des milieux de culture..
D'autre part, pour favoriser la croissance des bactéries lactiques, la présence de cofacteurs (cations) essentiels au métabolisme de Lactobacillus et des bactéries apparentées est nécessaire; ces composés sont les sels de sodium, de magnésium et de manganèse.
De même, le monoléate ou le polysorbate de sorbitan 80 sont une source importante d'acides gras car ils sont absorbés en tant que nutriments..
De plus, le monoléate de sorbitan et le citrate d'ammonium agissent en inhibant le développement de la flore qui l'accompagne, notamment les bactéries Gram négatives, apportant le caractère sélectif de cette gélose..
Enfin, l'agar-agar est celui qui donne la consistance solide au milieu.
Il existe d'autres variantes de la gélose Man Rogosa Sharpe; l'un d'eux est complété par de la cystéine (M.R.S.c), très utile pour l'isolement des bifidobactéries, entre autres microorganismes. D'autre part, il existe le milieu MRS supplémenté en néomycine, paromomycine, acide nalidixique et chlorure de lithium, notamment pour le comptage sélectif des bifidobactéries dans les produits laitiers..
Peser 68,25 grammes du milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Laisser reposer 5 minutes. Pour dissoudre complètement, tournez à une source de chaleur, en remuant fréquemment, et faites bouillir pendant 1 à 2 minutes. Stériliser en autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes.
A la sortie de l'autoclave, laisser reposer quelques minutes et répartir encore chaud dans des boîtes de Pétri stériles..
Laisser les assiettes se solidifier et inverser les assiettes, commander en racks à assiettes et réfrigérer jusqu'à utilisation. Laisser les assiettes revenir à température ambiante avant utilisation.
Le pH du milieu doit être de 6,4 ± 0,2. Certaines maisons commerciales recommandent un pH entre 5,5 et 5,9.
Le milieu déshydraté est beige et préparé est ambre foncé.
Le milieu déshydraté et les plaques préparées doivent être conservés entre 2 et 8 ° C..
Le M.R.S. Ils peuvent être semés en surface (épuisement ou à la spatule Drigalski). Il peut également être semé en profondeur. Les plaques doivent être incubées à 37 ° C en microaérophilie (4% Odeux et 5 à 10% de COdeux) pendant 24 à 72 heures.
Le mode de semis est choisi en fonction du but poursuivi (isolement ou comptage).
Les colonies présomptives de Lactobacillus poussent de couleur blanchâtre et ont un aspect mucoïde ou crémeux sur cette gélose. Plus tard, ils doivent être identifiés.
Pour cela, un semis de surface est utilisé. Les échantillons à semer nécessitent une procédure préalable.
Dans le cas d'échantillons de lait maternel, il est recommandé de centrifuger 1 ml de l'échantillon à 14 000 tr / min pendant 10 minutes, afin d'éliminer la couche grasse. 900 µl sont jetés, et dans les 100 µl restants, le culot est mis en suspension et versé sur la surface du M.R.S. Il doit ensuite être réparti uniformément avec une spatule Drigalski..
Dans le cas des échantillons de selles, un (1) gramme de selles est pesé et homogénéisé dans 9 mL d'eau peptonée stérile à 0,1%, correspondant à une dilution au 1/10. Ensuite, des dilutions en série sont effectuées, jusqu'à une dilution finale de 10-4.
Enfin 100 μl des 10 dilutions sont prélevés-deux, dix-3 et 10-4 et chaque dilution est ensemencée sur de la gélose MRS, répartie uniformément avec une spatule Drigalski.
Dans ce cas le semis se fait par profondeur.
Pour les échantillons de lait maternel, 1 ml est prélevé et placé dans un tube en plastique conique stérile. De la gélose MRS est ajoutée à une température approximative de 40 ° C jusqu'à un volume final de 25 mL, obtenant un mélange homogène. Ensuite, il est versé dans des boîtes de Pétri stériles de manière uniforme et laissé au repos jusqu'à polymérisation..
Pour les échantillons de selles, des dilutions sont effectuées, comme décrit précédemment. Prenez 1 mL de chaque dilution et placez-le dans des tubes en plastique coniques stériles. La gélose MRS fondue est ajoutée à un volume de 25 mL.
Le mélange de chaque dilution est versé uniformément dans des boîtes de Pétri stériles. Enfin il est laissé au repos jusqu'à sa polymérisation.
Chaque jour, l'étude des bactéries lactiques suscite de plus en plus d'intérêt; Les chercheurs cherchent en particulier à se renseigner sur les nouvelles souches et leur potentiel en tant que ferments de démarrage pour la normalisation dans la fabrication de produits laitiers, entre autres utilisations..
En ce sens, Alvarado et al. (2007) ont utilisé M.R.S. pour mener une étude dans laquelle ils ont isolé, identifié et caractérisé des bactéries lactiques présentes dans un fromage vénézuélien fumé andin artisanal.
Dans le fromage, ils ont trouvé la présence de bactéries des genres Lactococcus et Lactobacillus, et ont conclu que les mélanges de souches isolées conviennent comme souches de départ dans la fabrication de fromage à partir de lait pasteurisé..
D'autre part, Sánchez et al. (2017) ont utilisé M.R.S. d'étudier la présence de bactéries lactiques dans le tube digestif des porcelets, afin de les utiliser comme probiotiques natifs qui augmentent la productivité des porcelets en bonne santé.
Avec ce milieu, ils ont réussi à isoler quatre espèces: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Oui Pediococcus pentosaceus.
De même, Báez et al. (2019) ont utilisé M.R.S. pour évaluer les bactéries lactiques (LAB) et les bifidobactéries à potentiel probiotique dans le lait maternel et les selles infantiles.
Ils ont réussi à isoler 11 BAL et 3 Bifidobactéries sp dans le lait maternel, et 8 BAL et 2 Bifidobactéries sp. dans les matières fécales. Tous répondaient à certains paramètres qui les prouvent comme des bactéries à activité probiotique.
Les auteurs ont conclu que le lait maternel et les matières fécales des nourrissons exclusivement allaités sont des sources naturelles de bactéries probiotiques..
Pour évaluer la qualité de M.R.S. Contrôle des souches telles que:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli et Bacillus cereus.
Les résultats attendus sont une croissance satisfaisante pour les 6 premières bactéries, tandis que E. coli Oui Bacillus cereus doit être complètement inhibé.
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