La coloration de la capsule est une technique de coloration différentielle qui a la propriété de mettre en évidence la structure polysaccharidique qui entoure certaines bactéries et levures appelées capsule. Il est utilisé dans les laboratoires cliniques pour aider à diagnostiquer certaines pathologies causées par des microorganismes encapsulés..
Il est également utilisé dans les laboratoires d'enseignement pour la démonstration de cette structure morphologique aux étudiants de carrières en sciences de la santé, telles que: médecine, bioanalyse, soins infirmiers ou cytotechnologie, entre autres..
Il existe plusieurs techniques simples pour démontrer la présence de la capsule dans les microorganismes qui la possèdent, ce sont: le colorant négatif, le colorant Anthony et une variante qui combine les deux précédents.
La coloration négative est principalement utilisée dans les échantillons de LCR lorsque la présence de levure est suspectée. Cryptococcus neoformans. Cette levure est une cause fréquente de méningite.
Cette technique utilise de la nigrosine ou de l'encre de Chine et est basée sur la création d'un contraste entre le fond de la préparation et la capsule impénétrable du micro-organisme. Le fond devient sombre et la capsule est incolore. De cette façon, cette structure est mise en évidence.
Concernant la technique Anthony, on peut dire qu'elle est principalement utilisée dans les laboratoires d'enseignement pour démontrer la structure polysaccharidique chez des bactéries telles que Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Oui Neisseria meningitidis.
L'utilisation de cette technique à des fins de diagnostic est très rare, car il existe d'autres tests de routine qui permettent l'identification de ces micro-organismes..
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La capsule est une structure solide de nature polysaccharidique. Cela protège les micro-organismes de la phagocytose et constitue donc une structure difficile à pénétrer.
C'est pourquoi les taches de capsule sont basées sur le contraste. Les colorants tachent le fond de la préparation tandis que la capsule reste incolore.
Par conséquent, avec ces techniques, la capsule est facilement reconnaissable. Si le micro-organisme n'a pas de capsule, il ne se distinguera pas avec ce type de coloration, car tout sera taché de la même couleur..
Toutes les techniques utilisées pour colorer la capsule ont le même raisonnement malgré l'utilisation de colorants et de procédures différents..
La tache d'Anthony utilise le cristal violet comme tache. Cela tachera le corps bactérien et le fond en violet.
D'autre part, 20% de sulfate de cuivre est utilisé. Cela sert de solution de lavage, c'est-à-dire qu'il élimine l'excès de cristal violet de la préparation, rendant les capsules claires mais sans perdre la couleur du corps bactérien ou du fond..
- Lait irisé.
- Lame de microscope.
- 1% de cristal violet.
- 20% de sulfate de cuivre.
- Microscope optique.
- Huile d'immersion.
Cette technique consiste en:
Il est important de ne pas utiliser de chaleur ni pour fixer ni pour sécher, car cela endommage la capsule. Ne pas laver non plus à l'eau.
Le lait irisé est un excellent milieu de culture car il fournit les nutriments nécessaires au micro-organisme pour développer une capsule proéminente.
D'autre part, le lait irisé formera un fond épais et compact qui sera coloré en violet avec le corps bactérien, mais la capsule qui entoure le micro-organisme restera incolore. Par conséquent, un halo clair est observé autour du corps bactérien..
C'est une technique simple à réaliser. Aucune fixation requise.
De même, il convient de noter que d'autres milieux de culture peuvent être utilisés, mais le milieu laitier est préféré car il présente l'avantage de fournir des capsules plus proéminentes..
C'est une technique légèrement plus laborieuse que la coloration négative, et sa visualisation nécessite d'attendre que la préparation sèche complètement..
- Lames de microscope.
- Milieu de culture avec le micro-organisme.
- Encre de Chine ou nigrosine.
- Microscope optique.
- Solution saline physiologique.
Placez une goutte de solution saline physiologique sur la lamelle et dissolvez une petite partie de la culture microbienne. Il est important que la préparation ne soit pas trop épaisse. Placez ensuite une goutte d'encre de Chine ou de nigrosine et mélangez.
Une feuille de lamelle est ensuite placée sur la préparation sans déborder de liquide. Il est observé au microscope en se concentrant d'abord sur un objectif 10X puis en passant à 40X.
Cette technique peut également être utilisée directement sur des échantillons de LCR. Autrement dit, au lieu de placer une goutte de culture microbienne, une goutte de LCR est placée.
C'est une méthode simple à réaliser et en même temps peu coûteuse. Ne nécessite pas de fixation ou de séchage de la préparation.
Il présente l'inconvénient de devoir être observé au microscope avant que la préparation ne sèche, car si cela se produit, les micro-organismes se contracteront, ce qui rendra la visualisation difficile..
En revanche, des faux positifs peuvent survenir si l'analyste est inexpérimenté, car les leucocytes sont souvent confondus avec les levures..
L'observation de gélules de levure avec la technique de l'encre de Chine ou de la nigrosine doit être considérée comme un diagnostic présomptif de Cryptococcus neoformans jusqu'à ce qu'il soit démontré avec la culture.
En effet, il existe d'autres levures qui pourraient être à l'origine de la méningite et pas seulement la Cryptococcus neoformans, comme ceux du genre Candida et Rhodotorula, ainsi que d'autres espèces de Cryptococcus.
S'il y a des micro-organismes encapsulés, un fond sombre sera observé, avec des corps transparents flottant dans le liquide, soulignant la présence de la capsule..
Cette technique peut également être réalisée avec de la nigrosine. C'est une combinaison des techniques expliquées précédemment. Cette technique utilise du cristal violet et de l'encre de Chine ou de la nigrosine.
Le corps bactérien devient violet à partir du cristal violet car il est chargé négativement, tandis que la nigrosine colore le fond du frottis. Si la bactérie a une capsule, elle apparaîtra comme un halo transparent autour du micro-organisme..
Le cristal violet peut être remplacé par l'une de ces couleurs: safranine, fuchsine basique ou bleu de méthylène.
- Verre violet.
- Nigrosine ou encre de Chine.
- Lames de microscope.
- Microscope.
- Cultiver le microorganisme dans un milieu de culture.
- Placer une goutte de culture au bout d'une lame et à côté, déposer une goutte d'encre de Chine en cristal ou de nigrosine, mélanger et étaler avec l'extrémité d'une autre lame..
- Séchez à l'air et ne chauffez pas.
- Couvrir d'une solution de cristal violet pendant 1 minute, laver à l'eau distillée mais très délicatement (jet doux), laisser sécher à l'air.
- Observez au microscope avec un objectif à immersion. Rechercher vers les extrémités de la planche.
Un corps bactérien de couleur violette et un fond sombre seront visibles. La capsule, si elle est présente, apparaîtra incolore autour des bactéries.
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