le Gélose BHI La gélose Brain Heart Infusion Agar est un milieu de culture solide et nutritif. En espagnol, nous l'appelons gélose d'infusion cerveau-cœur. C'est un milieu de culture non sélectif, ce qui signifie que tous les types de bactéries Gram positives et Gram négatives peuvent se développer, ainsi que certaines levures et champignons filamenteux..
Il est composé d'une infusion de cerveau et de cœur de bœuf, d'hydrolysat peptique de tissus animaux, d'hydrolysat pancréatique de caséine, de chlorure de sodium, de glucose, de phosphate disodique et d'agar..
Il est à noter que la gélose BHI est l'un des milieux de culture les plus utilisés dans les laboratoires de bactériologie. Peut être utilisé sans supplément comme culture primaire, sous-culture de colonies obtenues sur d'autres milieux sélectifs ou pour l'entretien des souches en laboratoire.
En revanche, c'est un milieu idéal pour être utilisé comme base dans la préparation de milieux enrichis, tels que la gélose au sang et la gélose au chocolat. Les deux sont idéaux pour isoler les micro-organismes exigeants d'un point de vue nutritionnel. Cependant, il convient de noter que, dans la mesure où il contient du glucose, il ne convient pas pour observer les profils d'hémolyse..
De même, la gélose BHI peut être utilisée pour la préparation de milieux spéciaux pour l'isolement de micro-organismes pathogènes difficiles à cultiver dans des milieux communs, notamment: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae et Histoplasma capsulatum.
Avec l'additif antibiotique, la gélose BHI devient un milieu sélectif pour l'isolement des champignons.
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C'est un milieu de culture nutritif pour isoler les micro-organismes moyennement exigeants, et son enrichissement peut être augmenté avec l'ajout de sang et d'autres suppléments nutritionnels..
C'est un milieu de culture non sélectif, il permet donc la croissance de la plupart des bactéries Gram positives et Gram négatives, ainsi que de certains champignons. Cependant, il peut devenir sélectif avec l'ajout d'antibiotiques..
Le milieu contient une infusion de cerveau et de cœur de bœuf, un hydrolysat peptique de tissu animal et un hydrolysat de caséine pancréatique; tous ces composés agissent comme des sources de vitamines, d'acides aminés, d'azote et de carbone.
Le glucose est un glucide qui fournit de l'énergie aux micro-organismes une fois qu'ils l'ont fermenté. Pendant ce temps, le chlorure de sodium et le phosphate disodique maintiennent l'équilibre osmotique et fournissent un pH proche de la neutralité. Enfin, la gélose donne la consistance solide au milieu.
Peser 52 grammes du milieu déshydraté et dissoudre dans un litre d'eau distillée. Porter le mélange à une source de chaleur jusqu'à ébullition, en remuant fréquemment pendant le processus de dissolution..
Les plaques ou coins d'agar BHI peuvent être préparés sans additifs.
Pour la préparation des quartiers, servez la préparation jusqu'à ce que la moitié de chaque tube soit remplie, couvrez et stérilisez dans un autoclave à 121 ° C pendant 15 minutes, en partant, posez sur une base jusqu'à ce qu'elles se solidifient. Conserver plus tard au réfrigérateur jusqu'à utilisation.
Le mélange dissous est autoclavé à 121 ° C pendant 15 minutes, au départ on le laisse refroidir à 50 ° C et 20 ml du milieu sont servis dans des boîtes de Pétri stériles. Ils sont autorisés à se solidifier, sont retournés et conservés au réfrigérateur jusqu'à leur utilisation. Laisser les plaques revenir à température ambiante avant l'ensemencement.
Le pH du milieu doit rester à 7,4 ± 0,2.
Le support non préparé est de couleur beige et préparé est de couleur ambre clair.
Après stérilisation du milieu, refroidir à une température d'environ 45 à 50 ° C, puis ajouter le sang (50 ml), mélanger doucement pour homogénéiser et servir aseptiquement 20 ml dans chaque boîte de Pétri. Si des bulles se forment sur la plaque, la flamme du briquet doit passer rapidement sur les bulles pour les éliminer.
De même, des milieux spéciaux peuvent être préparés en ajoutant les additifs correspondants lorsque le mélange atteint une température de 45 à 50 ° C..
Le milieu est rouge cerise.
La gélose BHI sans additifs est utile comme culture primaire et pour semer des souches pures de micro-organismes peu ou moyennement exigeants pour leur identification ultérieure..
Comme il s'agit d'un milieu de couleur claire, il est idéal pour observer les pigments et, comme il ne contient pas de substances interférentes, certains tests biochimiques, tels que l'oxydase et la catalase, peuvent être effectués dessus, ou d'autres tests biochimiques peuvent être montés à partir de colonies de cette gélose.
De même, les quartiers de gélose BHI sont largement utilisés pour le maintien des souches pendant un certain temps en laboratoire (bacterioteca).
Les plaques ou coins ensemencés en surface avec des souches bactériennes sont incubés à 37 ° C pendant 24 à 48 heures. Alors que, chez les champignons, la température et le temps d'incubation dépendront du type de champignon recherché..
Avec cette base, vous pouvez préparer des supports enrichis et sélectifs.
Sa fonction principale est de servir de base à la préparation de gélose au sang pour une utilisation courante dans les laboratoires de microbiologie. Surtout, la base BHI est propice à l'isolement des souches de Streptococcus sp. Cependant, il présente l'inconvénient de ne pas convenir à l'observation des profils d'hémolyse car il contient du glucose..
Il est également utilisé dans la préparation de gélose au sang de lapin ou de cheval pour l'isolement de Haemophilus sp. Pour de meilleurs résultats, un supplément d'enrichissement (IsoVitaleX) peut être ajouté.
Si les échantillons proviennent des voies respiratoires vers la gélose, de la bacitracine peut être ajoutée pour inhiber la flore qui l'accompagne et augmenter la probabilité de récupération des souches de Haemophilus sp.
D'autre part, la gélose au sang (agar ou humain) avec tellurite de cystine peut être préparée pour isoler Corynebacterium diphtheriae. De même, il est utile de préparer de la gélose au sang de lapin, avec l'ajout de cystine et de glucose pour l'isolement de Francisella tularensis.
Les plaques de gélose au sang sont semées par épuisement et elles sont incubées à 35-37 ° C pendant 24-48 heures en microaérophilicité (5-10% COdeux).
Ce milieu avec l'ajout d'antibiotiques peut remplacer la gélose Sabouraud pour l'isolement des champignons..
L'association de la gélose BHI avec du chloramphénicol - gentamicine ou pénicilline -, de la streptomycine et du sang de cheval est idéale pour l'isolement de Histoplasma capsulatum.
Selon le microorganisme à isoler, une incubation à 35-37 ° C ou à température ambiante en aérobiose est recommandée. Parfois, une incubation est nécessaire dans les deux plages de température, en utilisant 2 plaques pour cela..
Certains champignons aiment Trichophyton mentagrophytes doit être incubé à température ambiante jusqu'à 7 jours.
A partir de chaque lot préparé, il est recommandé d'incuber 1 plaque ou coin à 37 ° C pendant 24 heures et de vérifier qu'il n'y a pas de croissance; particulièrement important lors de la préparation de la gélose au sang, car il s'agit d'un milieu facilement contaminé.
D'autre part, la qualité du milieu peut être évaluée en inoculant des souches standards connues ou certifiées et en observant leur développement..
En ce sens, pour évaluer la gélose BHI sans additifs, les souches de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 ou Candida albicans ATCC 10231. Incuber à 37 ° C en aérobiose pendant 24 à 48 heures. Une croissance satisfaisante est attendue dans tous les cas.
Pour évaluer les plaques de gélose au sang, les souches de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 ou Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.
Les souches bactériennes sont incubées à 37 ° C en microaérophilie pendant 24 heures, tandis que le champignon est incubé à température ambiante dans une chambre humide jusqu'à 7 jours. Une croissance satisfaisante est attendue dans tous les cas.
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