La néphélométrie consiste à mesurer le rayonnement provoqué par des particules (en solution ou en suspension), mesurant ainsi la puissance du rayonnement diffusé sous un angle autre que la direction du rayonnement incident.
Lorsqu'une particule en suspension est frappée par un faisceau de lumière, une partie de la lumière est réfléchie, une autre partie est absorbée, une autre est déviée et le reste est transmis. C'est pourquoi lorsque la lumière atteint un milieu transparent dans lequel se trouve une suspension de particules solides, la suspension apparaît trouble..
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Au moment où un faisceau de lumière frappe les particules d'une substance en suspension, la direction de propagation du faisceau change de direction. Cet effet dépend des aspects suivants:
1. dimensions de la particule (taille et forme).
2.Caractéristiques de la suspension (concentration).
3. longueur d'onde et intensité lumineuse.
4. distance de la lumière incidente.
5. angle de détection.
6. indice de réfraction du milieu.
Le néphélomètre est un instrument utilisé pour mesurer les particules en suspension dans un échantillon liquide ou dans un gaz. Ainsi, une cellule photoélectrique placée à un angle de 90 ° par rapport à une source lumineuse détecte le rayonnement des particules présentes dans la suspension..
De plus, la lumière réfléchie par les particules vers la photocellule dépend de la densité des particules. Le diagramme 1 présente les composants de base qui composent un néphélomètre:
En néphélométrie, il est d'une importance vitale d'avoir une source de rayonnement avec un rendement lumineux élevé. Il existe différents types, allant des lampes au xénon et des lampes à vapeur de mercure, aux lampes halogènes au tungstène, au rayonnement laser, entre autres..
Ce système est situé entre la source de rayonnement et la cuvette, de sorte que de cette manière un rayonnement avec des longueurs d'onde différentes par rapport au rayonnement souhaité est évité sur la cuvette..
Sinon, des réactions de fluorescence ou des effets de chauffage dans la solution entraîneraient des écarts par rapport à la mesure..
C'est un récipient généralement prismatique ou cylindrique, et il peut avoir différentes tailles. En cela, vous trouverez la solution à l'étude.
Le détecteur est situé à une distance déterminée (généralement très proche de la cuvette) et se charge de détecter le rayonnement diffusé par les particules de la suspension..
Généralement, c'est une machine électronique qui reçoit, convertit et traite des données, qui dans ce cas sont les mesures obtenues à partir de l'étude réalisée..
Chaque mesure est sujette à un pourcentage d'erreur, qui est principalement donné par:
Cuvettes contaminées: dans les cuvettes, tout agent extérieur à la solution étudiée, qu'il soit à l'intérieur ou à l'extérieur de la cuvette, réduit la lumière rayonnante sur le chemin du détecteur (cuvettes défectueuses, poussières adhérant aux parois de la cuvette).
Ingérence: la présence d'un contaminant microbien ou de la turbidité disperse l'énergie radiante, augmentant l'intensité de la dispersion.
Composés fluorescents: ce sont ces composés qui, lorsqu'ils sont excités par un rayonnement incident, provoquent des lectures erronées et à haute densité de diffusion.
Stockage des réactifs: Une température du système inadéquate pourrait entraîner des conditions d'étude défavorables et entraînerait la présence de réactifs troubles ou précipités.
Fluctuations de la puissance électrique: pour éviter que le rayonnement incident ne soit une source d'erreur, des stabilisateurs de tension sont recommandés pour un rayonnement uniforme.
La puissance radiante du rayonnement détecté étant directement proportionnelle à la concentration massique des particules, les études néphélométriques ont - en théorie - une sensibilité métrologique plus élevée que d'autres méthodes similaires (comme la turbidimétrie).
De plus, cette technique nécessite des solutions diluées. Cela permet de minimiser les phénomènes d'absorption et de réflexion..
Les études néphélométriques occupent une place très importante dans les laboratoires cliniques. Les applications vont de la détermination des immunoglobulines et des protéines de phase aiguë, au complément et à la coagulation.
Lorsqu'un échantillon biologique contient un antigène d'intérêt, il est mélangé (dans une solution tampon) avec un anticorps pour former un complexe immun..
La néphélométrie mesure la quantité de lumière diffusée par la réaction antigène-anticorps (Ag-Ac), et de cette manière les complexes immuns sont détectés.
Cette étude peut être réalisée par deux méthodes:
Cette technique peut être utilisée pour l'analyse du point final, dans laquelle l'anticorps de l'échantillon biologique étudié est incubé pendant vingt-quatre heures..
Le complexe Ag-Ac est mesuré à l'aide d'un néphélomètre et la quantité de lumière diffusée est comparée à la même mesure effectuée avant la formation du complexe..
Dans cette méthode, la vitesse de formation du complexe est surveillée en continu. La vitesse de réaction dépend de la concentration de l'antigène dans l'échantillon. Ici, les mesures sont prises en fonction du temps, donc la première mesure est prise au temps "zéro" (t = 0).
La néphélométrie cinétique est la technique la plus largement utilisée, puisque l'étude peut être réalisée en 1 heure, par rapport à la longue période de temps de la méthode du point final. Le taux de dispersion est mesuré juste après l'ajout du réactif.
Par conséquent, tant que le réactif est constant, la quantité d'antigène présente est considérée comme directement proportionnelle au taux de changement.
La néphélométrie est généralement utilisée dans l'analyse de la qualité chimique de l'eau, pour déterminer la clarté et contrôler ses processus de traitement..
Il est également utilisé pour mesurer la pollution de l'air, dans laquelle la concentration des particules est déterminée à partir de la dispersion qu'elles produisent dans une lumière incidente..
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